重组共表达载体pSNAV2.0 HSV1tkIREShIL1Ra的构建及其在滑膜细胞中的表达

   目的引入内部核糖体进入位点（IRES），构建HSV1 tk与hIL 1Ra双基因共表达AAV重组载体并检测其在滑膜细胞中的表达。方法PCR扩增HSV1 tk、IRES及hIL 1Ra基因片段，分别与pMD18 T simple载体连接，测序后，hIL 1Ra与HSV1 tk先后插入pMD IRES，构建重组质粒pMD HSV1 tk IRES hIL 1Ra，酶切出HSV1 tk IRES hIL 1Ra片段，克隆至AAV载体质粒pSNAV2.0上，构建成重组共表达质粒pSNAV2.0 HSV1 tk IRES hIL 1Ra，酶切鉴定后，用脂质体转染上述质粒至原代骨关节炎（OA）滑膜细胞，RT PCR法鉴定共表达质粒在滑膜细胞中的表达。结果酶切鉴定证实重组共表达质粒构建正确；RT PCR检测到转染后的OA滑膜细胞中表达HSV1 tk与hIL 1Ra。结论成功构建了重组共表达质粒pSNAV2.0 HSV1 tk IRES hIL 1Ra；重组质粒转染OA滑膜细胞后，能表达HSV1 tk与hIL 1Ra。这为OA的基因治疗研究提供了理论依据。