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小鼠Tox3基因重组慢病毒载体的构建及其在卵巢颗粒细胞中的表达
引用本文:崔玉倩,赵涵,马增香,赵世斗,徐海静,王文婷,郭海鹏,陈子江. 小鼠Tox3基因重组慢病毒载体的构建及其在卵巢颗粒细胞中的表达[J]. 国际生殖健康/计划生育杂志, 2014, 33(2): 95-98
作者姓名:崔玉倩  赵涵  马增香  赵世斗  徐海静  王文婷  郭海鹏  陈子江
作者单位:200127 上海交通大学医学院附属仁济医院生殖医学中心
基金项目:国家自然科学青年基金(项目编号:81300459)中国博士后科学基金(项目编号:2012M520909)
摘    要:
目的:构建重组慢病毒载体pCDH-Tox3-Flag,并检测其转染小鼠原代卵泡颗粒细胞后的表达情况。方法:利用DNA重组技术将小鼠Tox3基因克隆入慢病毒表达载体pCDH-MCS-T2A-copGFP-MSCV中,通过酶切、测序验证后,将重组慢病毒载体pCDH-Tox3-Flag、包装质粒psPAX2和包膜质粒pMD2.G共转染HEK293FT细胞,包装重组慢病毒LV-Tox3-Flag,并感染小鼠原代颗粒细胞,用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测Tox3 mRNA的转录水平,蛋白质印迹(Western blot)法检测TOX3-Flag蛋白的表达情况。结果:经酶切及测序结果证实,构建了重组慢病毒载体LV-Tox3;RT-PCR及Western blot 结果显示慢病毒感染小鼠原代颗粒细胞后,Tox3基因能在细胞内正确转录、翻译并稳定表达TOX3蛋白。结论:成功建立Tox3基因慢病毒表达载体LV-Tox3-Flag,包装的慢病毒能够成功感染小鼠原代颗粒细胞,并使Tox3基因得到稳定表达,为后续研究Tox3基因在生殖相关疾病的生理与病理作用奠定了基础。

关 键 词:Tox3  慢病毒载体  粒层细胞  小鼠  

Construction of the Recombinant Lentiviral Vector Containing Mouse Tox3 Gene and Its Expression in Primary Granulosa Cells
CUI Yu-qian,ZHAO Han,MA Zeng-xiang,ZHAO Shi-dou,XU Hai-jing,WANG Wen-ting,GUO Hai-peng,CHEN Zi-jiang. Construction of the Recombinant Lentiviral Vector Containing Mouse Tox3 Gene and Its Expression in Primary Granulosa Cells[J]. Journla of International Reproductive Health/Family Planning, 2014, 33(2): 95-98
Authors:CUI Yu-qian  ZHAO Han  MA Zeng-xiang  ZHAO Shi-dou  XU Hai-jing  WANG Wen-ting  GUO Hai-peng  CHEN Zi-jiang
Affiliation:Reproductive Medical Center,Renji Hospital,Shanghai Jiao Tong University School of Medicine,Shanghai 200127,China
Abstract:
Keywords:Tox3  Lentiviral vector  Granulosa cells  Mice  
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