生肌调节因子和连接蛋白43基因诱导大鼠成纤维细胞分化为肌细胞实验研究

目的探讨转染生肌调节因子（myoblast determination，MyoD）基因和连接蛋白43（Connexin，Cx43）基因的大鼠真皮成纤维细胞（dermal fibroblast，DFs）生物学功能的变化及MyoD和Cx43基因转染DFs细胞治疗心力衰竭的可行性。方法采用Gateway技术，构建真核质粒表达载体。利用慢病毒（LV）表达系统，将大鼠MyoD cDNA和Cx43 cDNA转入大鼠成纤维细胞中，经Blasticidin筛选培养，通过RT-PCR，Western印迹法等方法检测MyoD及Cx43蛋白及mRNA表达情况，并且通过显微镜观察转染后生长情况，膜片钳技术检测离子电流变化。结果RT-PCR，Western印迹法检测出MyoD及Cx43蛋白及相应mRNA表达，膜片钳检测到转染后钙离子电流，显微镜观察到基因转染筛选后培养1w细胞的融合现象，并有多核肌管形成。结论MyoD和Cx43基因转染使DFs分化为成肌细胞，为进一步研究基因治疗心力衰竭奠定基础。