| 摘 要： | 目的探讨表观遗传学调控对男性不育的影响及作用机制。方法选择2020年2月至12月于广东省妇幼保健院生殖健康与不孕症科门诊就诊患者作为研究对象,分为对照组(50例)及不育组(50例)。收集精液标本,采用Real time-PCR和Western blot检测DNMT1、ERp29、PTEN、TSC2 m RNA和蛋白表达,采用甲基化DNA免疫共沉淀测序(Me DIP-Seq)检测甲基化差异显著的基因。采用GC1、GC2、TM4精子细胞株,分为空白对照组(Con组)、ERp29沉默组(sh ERp29组)、ERp29过表达组(ERp29~(OE)组)。去甲基药物(5-AZA-DC)处理后进行甲基化特异性PCR(MSP)、细胞增殖、凋亡能力检测。结果与对照组相比,不育组患者DNMT1 m RNA[5.25±1.12 vs 8.22±0.67,P<0.05]和蛋白[3.33±0.98 vs 7.31±0.55,P<0.01]表达上调,差异具有统计学意义;ERp29 m RNA[5.17±0.98 vs 2.27±0.33,P<0.05]和蛋白[6.12±1.03 vs 2.59±0.43,P<0.05]、PTEN m RNA[4.58±0.77 vs 1.97±0.28,P<0.05]和蛋白[6.21±1.04 vs 2.28±0.36,P<0.05]、TSC2 m RNA[6.39±0.83 vs 3.16±0.52,P<0.05]和蛋白[6.56±0.67 vs 3.03±0.17,P<0.05]表达下调,差异具有统计学意义。Me DIP-Seq结果显示,不育组中ERp29、PTEN和TSC2启动子区域甲基化水平差异显著,有统计学意义(P<0.05)。MSP证实GC1细胞株PTEN基因启动子区Cp G岛DNA甲基化,5-AZA-DC干预前sh ERp29、ERp29~(OE)组甲基化上升,干预后sh ERp29、ERp29~(OE)组甲基化下降。GC1、GC2、TM4细胞株5-AZA-DC干预后sh ERp29和ERp29~(OE)组增殖上调,凋亡下降,差异有统计学意义(P<0.05),Con组无统计学意义(P>0.05)。结论 ERp29是引起男性不育发病的重要基因,可作为男性不育表观遗传学治疗的潜在靶点。
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