| “荧光定量PCR溶解曲线法”监测人TCRβ链CDR3谱系漂移技术的建立 |
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| 引用本文： | 马锐,罗荣,孙万邦,姚新生. “荧光定量PCR溶解曲线法”监测人TCRβ链CDR3谱系漂移技术的建立[J]. 免疫学杂志, 2009, 25(4) |
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| 作者姓名： | 马锐 罗荣 孙万邦 姚新生 |
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| 作者单位： | 遵义医学院第三附属医院 |
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| 基金项目： | 国家重点基础研究发展规划(973计划)，国家自然科学基金，教育部科学技术研究项目，贵州省科技厅项目 |
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| 摘 要： | 目的 建立"荧光定量PCR溶解曲线分析技术"监测人外周血T细胞TCR β链CDR3谱系漂移(单/寡/多克隆增生).方法 提取4例正常人、9例大肠癌患者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell-PBMC)中的总RNA,逆转录成cDNA,以26个人TRBV基因家族设计上游引物,共同的TRBC基因设计下游引物,荧光定量PCR(FQ-PCR)扩增26个TRBV基因各家族CDR3谱系,溶解曲线法分析各家族CDR3谱系的单/寡/多克隆增生.结果 正常人外周血T细胞TCR β链26个家族CDR3表达频率不一致,各家族PCR产物的"溶解曲线谱型图"(melting curve spectratyping)呈现溶点不同的CDR3多态性,为多克隆增生的高斯分布;9例大肠癌患者的外周血TCR β链CDR3谱系的26个家族CDR3表达频率不一致,有的患者部分家族呈缺失状态,患者各家族PCR产物的"溶解曲线谱型图"上,多数家族为多克隆增生的高斯分布,但每个患者均出现数量不等的单克隆和寡克隆增生家族.结论 "荧光定量PCR溶解曲线分析TCR CDR3谱系漂移技术",方法稳定简便,能较好的监测正常人和临床样本外周血T细胞TCR β链CDR3谱系漂移(单/寡/多克隆增生).
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| 关 键 词： | T淋巴细胞受体 互补决定区3 荧光定量PCR 溶解曲线 |
Establishment of the real-time fluorescence quantitative reverse transcription polymerase chain reaction with DNA melting curve analysis for detecting the CDR3 skewing of TCR beta gene repertoire in the human peripheral blood |
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| MA Rui,LUO Rong,SUN Wanbang,YAO Xinsheng. Establishment of the real-time fluorescence quantitative reverse transcription polymerase chain reaction with DNA melting curve analysis for detecting the CDR3 skewing of TCR beta gene repertoire in the human peripheral blood[J]. Immunological Journal, 2009, 25(4) |
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| Authors: | MA Rui LUO Rong SUN Wanbang YAO Xinsheng |
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| Affiliation: | MA Rui,LUO Rong,SUN Wanbang,YAO Xinsheng Department of Immunology,ZunYi Medical College,ZunYi 563003,China |
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