靶向STAT5的RNAi重组质粒的构建与鉴定

摘要:目的：构建靶向信号转导及转录激活因子5（STAT5）的RNAi重组质粒并进行鉴定。 方法：设计针对STAT5编码区的有短发夹结构的3对DNA序列，克隆到质粒载体Pgenesil-1中构建重组质粒，再对其进行酶切鉴定、DNA 测序分析。脂质体法转染重组质粒至SMMC7721细胞株中，westernblot、RT-PCR检测STAT5基因表达。 结果：酶切鉴定和测序分析提示，靶向STAT5的RNAi重组质粒构建成功，3条靶向STAT5的序列特异性小发夹状RNA（shRNA）可有效抑制SMMC7721细胞STAT5表达，mRNA表达抑制率分别为70.43%、43.02%、45.07%，蛋白质表达抑制率分别为67.45%、37.36%、41.86%(P<0.05)。其中以Pgenesil-1-STAT5A1抑制效应最强。 结论：成功构建靶向STAT5的RNAi重组质粒，为进一步用该重组干扰载体进行体内肿瘤基因治疗的研究奠定了基础。

Construction and identification of recombinant RNA interference plasmid targeting to STAT5