外源性小分子双链RNA激活肾癌细胞野生型P53蛋白表达作用的研究

目的 通过转染外源性低分子双链RNA （dsRNA） dsP53~285至人肾癌细胞系ACHN和786-O,观察其激活肾癌细胞中抑癌蛋白野生型P53的表达作用。方法 根据对肾癌细胞的不同处理分为3组,即空白对照（mock）组、阴性对照（转染dsControl）组和实验（dsP53-285）组。荧光实时定量聚合酶链反应（QPCR）和免疫印迹法（Western blot）分别检测P53 mRNA、P21 mRNA和相应蛋白的表达水平。MTT法和集落形成实验检测各组细胞活力及增殖能力。结果 QPCR检测显示dsP53-285能明显促进两种肾癌细胞中P53 mRNA和P21 mRNA水平的升高;与阴性对照组dsControl组相比,dsP53-285分别上调ACHN和786-O细胞中P53 mRNA的表达2.84倍（P<0.01）和3.20倍（P<0.01）,dsP53-285分别上调ACHN和786-O细胞中P21 mRNA的表达2.33倍（P<0.01）和2.59倍（P<0.01）;mock组与dsControl组相比,两种细胞系中P53 mRNA和P21 mRNA的表达差异均没有统计学意义（P>0.05）。Western blot法检测显示在两种细胞系中,P53蛋白、P21蛋白表达水平的上调与相应的P53 mRNA、P21 mRNA水平的上调一致。MTT检测结果显示,与dsControl组相比,转染dsP53-285后,ACHN和786-O细胞活力显著降低（P<0.01）,mock组与dsControl组无明显差异（P>0.05）。集落形成实验显示,dsP53-285组的集落数数量显著较少（P<0.05）,mock组与dsControl组无明显差异（P>0.05）。结论 外源性dsP53-285能显著激活肾癌细胞中P53基因的表达,激活的P53蛋白为野生型而非突变型,并可以显著抑制肾癌细胞的生长。