利用Cre-loxP系统构建AT2细胞特异性敲除HDAC3基因小鼠

目的 应用Cre-loxP 重组酶系统构建AT2细胞特异性敲除HDAC3基因小鼠HDAC3flox/flox Sftpc-Cre(+/-)模型。方法 首先将Sftpc-Cre(+/-)小鼠自交以获得更多的Sftpc-Cre(+/-)小鼠,将HDAC3flox/-小鼠自交以获得HDAC3flox/flox小鼠和HDAC3flox/-小鼠；然后,将Sftpc-Cre(+/-)小鼠与HDAC3flox/flox小鼠或HDAC3flox/-小鼠杂交,得到双杂合HDAC3flox/-Sftpc-Cre(+/-)小鼠；最后将HDAC3flox/-Sftpc-Cre(+/-)小鼠与HDAC3flox/flox小鼠或HDAC3flox/-小鼠杂交,获得目的小鼠HDAC3flox/flox Sftpc-Cre(+/-)；对产生的子代剪取鼠尾提取基因组DNA,选取相对应的引物对目的基因进行扩增,扩增产物经琼脂糖凝胶电泳实验以鉴定基因型。选取6~8周龄的目的小鼠及对照组小鼠(HDAC3flox/flox)各3只,取肺组织进行免疫荧光双标实验以验证HDAC3敲除效果,取心脏、肝脏、肺、肾脏组织进行HE染色以观察两种小鼠各脏器的组织形态。结果琼脂糖凝胶电泳实验正确鉴定出了子代小鼠,筛选出了目的小鼠HDAC3flox/flox Sftpc-Cre(+/-)。HDAC3在小鼠肺AT2细胞中被成功敲除。两种小鼠的心脏、肝脏、肺和肾脏组织形态无明显改变。结论 本研究利用Cre-loxP技术成功构建了AT2细胞特异性敲除HDAC3基因小鼠,为后续进一步研究HDAC3基因在肺部疾病发生、发展中的作用提供了优良的工具。