| 抗转铁蛋白受体单链抗体原核表达载体的构建和表达 |
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| 引用本文： | 朱慧芬,杨道锋,沈关心,周春. 抗转铁蛋白受体单链抗体原核表达载体的构建和表达[J]. 华中科技大学学报(医学版), 2004, 33(4): 402-405 |
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| 作者姓名： | 朱慧芬 杨道锋 沈关心 周春 |
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| 作者单位： | 1. 华中科技大学同济医学院基础医学院免疫学系,武汉,430030
2. 华中科技大学同济医学院附属同济医院感染科,武汉,430030 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金资助项目 (No 39970 6 93) |
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| 摘 要： | 目的 构建抗转铁蛋白受体(TfR)单链抗体原核表达载体，为进一步研究其效应奠定基础。方法 从抗TfR单克隆抗体重链和轻链可变区基因的克隆载体pGEM-T-VH和pGEM-T-VL中扩增重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)基因，用重叠延伸PCR的方法，在VH和VL基因间引入连接短肽(Linker)，构建VH-Linker-VL的单链抗体(single chain Fv，scFv)基因。经NcoⅠ和NotⅠ酶切后亚克隆到原核分泌型表达载体pUCl9／119上，转化和筛选后，阳性细菌经IPTG诱导表达。间接免疫荧光法(IFA)及抗体封闭试验鉴定其抗体活性。结果 凝胶电泳可见重叠延伸PCR扩增产物约700bp条带，SDS-PAGE鉴定表达产物的分子量为27kD左右，与scFv的理论值一致，IFA及抗体封闭试验证明表达产物有抗人TfR的活性。结论 本研究成功地构建并表达了抗人TfR scFv，为抗人TfRscFv的应用奠定了基础。
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| 关 键 词： | 抗转铁蛋白受体 单链抗体 原核表达 跨膜糖蛋白 |
| 修稿时间： | 2003-09-03 |
Construction and Expression of a Single-chain Antibody against Transferrin Receptor |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | transferrin receptor splicing overlap extension PCR single chain antibody |
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