| 人胰腺α-淀粉酶的cDNA克隆和原核表达的初步研究 |
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| 引用本文： | 涂向东,谢飞,兰风华,朱忠勇. 人胰腺α-淀粉酶的cDNA克隆和原核表达的初步研究[J]. 中华检验医学杂志, 2004, 27(7): 452-455 |
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| 作者姓名： | 涂向东 谢飞 兰风华 朱忠勇 |
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| 作者单位： | 南京军区福州总医院全军医学检验中心实验科 |
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| 摘 要： | 目的 获得人胰腺α-淀粉酶(AMY2A)基因并进行原核表达。方法 采用基因工程技术,根据人AMY2A基因序列设计并合成特异性引物;从人胰腺组织中提取总RNA,反转录成CDNA第一链;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增人胰腺AMY2A基因,经BamH Ⅰ和Kpn Ⅰ双酶切、连接并插入原核表达载体pGEX-5T,构建pGEX-5T-AMY2A重组表达载体,在大肠杆菌BL21中异丙基硫代半乳糖苷酶(IPTG)诱导表达AMY2A蛋白。包涵体经尿素变性、复性及谷胱苷肽琼脂糖柱亲和层析纯化、AMY2A酶活性测定和免疫印迹分析。结果 重组质粒测序和酶切结果显示AMY2A基因已正确插入pGEX-5T,重组蛋白、复性及纯化产物SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)在84 000处有一条明显的蛋白表达条带,AMY2A检测具有酶活性,免疫印迹分析表明重组蛋白具有人胰腺淀粉酶抗原性。结论 作者已克隆并在大肠杆菌中初步表达并获得纯化的谷胱苷肽转移酶(GST)-AMY2A融合蛋白。
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| 关 键 词： | α-淀粉酶 克隆 原核表达 纯化 |
| 修稿时间： | 2004-01-30 |
cDNA cloning and prokaryotic expression of human pancreatic alpha-amylase |
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| TV Xiang-dong,XIE Fei,LAN Feng-hua,ZHU Zhong-yong . Center for laboratory Medicine of Fuzhou General Hospital,Nanjing Military Area,Fuzhou ,China. cDNA cloning and prokaryotic expression of human pancreatic alpha-amylase[J]. Chinese Journal of Laboratory Medicine, 2004, 27(7): 452-455 |
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| Authors: | TV Xiang-dong XIE Fei LAN Feng-hua ZHU Zhong-yong . Center for laboratory Medicine of Fuzhou General Hospital Nanjing Military Area Fuzhou China |
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| Affiliation: | TV Xiang-dong,XIE Fei,LAN Feng-hua,ZHU Zhong-yong . Center for laboratory Medicine of Fuzhou General Hospital,Nanjing Military Area,Fuzhou 350025,China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | alpha-amylase Cloning Prokaryotic expression Purification |
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