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| 抗肝癌单链抗体融合人突变型TNFalpha的构建与表达 | |
| 作者姓名： | 张静 刘彦仿 杨守京 孙志伟 乔庆 张素珍 |
| 作者单位： | 中国人民解放军第四军医大学病理学教研室 陕西省西安市 710033.jzhang@fmmu.edu.cn |
| 基金项目： | 军队重点项目,98M098, |
| 摘 要： | 目的鼠/人源化抗人肝癌单链抗体(m/hscFv25)融合人突变型TNFα(mTNFα)原核表达载体的构建及表达.方法用Oligo软件分析并设计人mTNFα的5及3端引物,化学合成并用PCR方法扩增mTNFα,经限制性内切酶酶切后,连接在原核表达载体pGEX4T-1中的m/hscFv25之后,构建成pGEX4T-1/m/hscFv25-mTNFα融合蛋白表达载体,转化大肠杆菌JM109后,通过IPTG诱导进行目的蛋白的初步表达.结果经DNA电泳分析表明,mTNFα基因全长约460 bp,并通过酶切鉴定证明成功构建了抗人肝癌单链抗体融合mTNFα的原核表达载体,融合蛋白产物经SDS-PAGE显示,相对分子质量(Mr)为68 000的蛋白谱带,与预期设计完全一致,光密度扫描结果表明,GST-mscFv25-mTNFα和GST-hscFv25-mTNFα融合蛋白分别占菌体总蛋白的15%和12%,表达产物主要以不溶性包涵体形式存在.结论成功构建并表达了鼠/人源化抗人肝癌单链抗体融合人mTNFα的双功能抗体基因,并在原核细胞中获得较高水平的表达,为进一步研究HCC的治疗奠定了基础. |
| 关 键 词： | 肝细胞瘤 单链抗体(scFv) 基因表达 大肠杆菌 谷胱甘肽转硫酶(GST) 聚合酶链式反应 |
| 修稿时间： | 2000-03-04 |
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