| 逆转录病毒介导的HO-1基因在尼洛替尼诱导K562/A02耐药细胞凋亡中的作用 |
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| 引用本文： | 陈埕,王季石,秦东,杨远,于艳艳,方琴.逆转录病毒介导的HO-1基因在尼洛替尼诱导K562/A02耐药细胞凋亡中的作用[J].中华血液学杂志,2012,33(5). |
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| 作者姓名： | 陈埕 王季石 秦东 杨远 于艳艳 方琴 |
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| 作者单位： | 贵阳医学院附属医院血液科、药剂科,550004 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金,贵州省科学技术平台建设项目,贵州省优秀教育人才省长基金,贵州省科技厅基金,贵阳市科技局基金 |
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| 摘 要： | 目的 研究逆转录病毒介导的血红素加氧酶-1(HO-1)基因在尼洛替尼(Nilotinib,AMN107)诱导慢性髓性白血病(CML)耐药细胞凋亡中的作用.方法 制备高病毒滴度的逆转录病毒载体pQCXIP-EGFP-HO-1,建立稳定转染HO-1基因的K562/A02细胞.采用RT-PCR鉴定K562/A02细胞中HO-1基因的表达.RT-PCR和Western blot法检测AMNl07作用24 h后K562/A02细胞中HO-1 mRNA和蛋白的表达,采用MTT法观察细胞增殖变化,通过实时荧光定量PCR(RQ-PCR)法检测bcr-abl融合基凶的表达.通过流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期分布.结果 成功构建重组逆转录病毒载体,并建立稳定转染HO-1基因的K562/A02细胞系;证实转基冈组细胞HO-1 mRNA显著表达.AMN107作用3组细胞后,转基因组细胞HO-1 mRNA和蛋白的表达明显高于转空载体组和未转染组,差异有统计学意义(P<0.05);MTT法检测显示AMN107处理后细胞增殖受抑.而转基因组细胞存活率明显高于转空载体组和未转染组,差异有统计学意义(P<0.05);RQ-PCR法检测结果显示,10 ILLmol/L AMNl07抑制bcr-abl基因的表达,但转基因组的bcr-abl基因表达水平(Ct值18.15±0.18)高于转空载体组(20.32±0.20)和未转染组(20.51±0.21),差异有统计学意义(P<0.05);流式细胞术检测结果显示10 μmol/L AMNl07作用24 h后,转基因组、转空载体组、未转染组细胞凋亡率分别为(17.26±0.23)%、(39.47±0.17)%、(41.84±0.09)%.未加药转基因组、未加药未转染组细胞凋亡率分别为(3.74±0.03)%、(5.91±0.08)%;细胞周期分析结果显示经AMNl07处理后,Go/G1期和S期细胞明显减少,细胞阻滞在G2/M期,而转基因细胞组细胞周期改变不如转空载体组、未转染组明显.结论 AMN107可抑制CML耐药细胞增殖且诱导细胞凋亡,HO-1基因在CML耐药细胞凋亡过程中起保护作用,与促进CML耐药细胞的生长有关.
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| 关 键 词： | 血红素加氧酶-1 逆转录病毒载体 尼洛替尼 K562/A02细胞 |
The effect of retrovirus-mediated HO-1 gent on chronic myeloid leukemia resistance cell KS62/A02 apoptosis induced lay nilotinib |
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| CHEN Cheng
,
WANG Ji-shi
,
QIN Dong
,
YANG Yuan
,
YU Yan-yan
,
FANG Qin.The effect of retrovirus-mediated HO-1 gent on chronic myeloid leukemia resistance cell KS62/A02 apoptosis induced lay nilotinib[J].Chinese Journal of Hematology,2012,33(5). |
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| Authors: | CHEN Cheng WANG Ji-shi QIN Dong YANG Yuan YU Yan-yan FANG Qin |
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