| NKG2D真核表达载体的构建及其对YT细胞生物学功能的影响 |
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| 引用本文： | 许晓群,张建,张彩,游力,张建华,刘金生,王郡甫,高春义,田志刚.NKG2D真核表达载体的构建及其对YT细胞生物学功能的影响[J].中国免疫学杂志,2005,21(12):885-888. |
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| 作者姓名： | 许晓群 张建 张彩 游力 张建华 刘金生 王郡甫 高春义 田志刚 |
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| 作者单位： | 1. 山东省医学科学院基础医学研究所,济南,250062
2. 山东大学药学院,济南,250012 |
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| 基金项目： | 本文受国家自然科学基金项目（30371302、3047152）和山东省自然科学基金资助项目（Y2202C24）资助 |
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| 摘 要： | 目的：建立NK细胞受体NKG2D真核表达载体，通过转染NK细胞系YT，初步探讨NKG2D分子对YT细胞系杀伤功能的增强作用。方法：用RT-PCR方法从NK-92细胞中调取NKG2D基因片段，克隆到pGEM-TEasy载体并对克隆的DNA片段进行序列分析。用限制内切酶EcoRⅠ和BamHⅠ消化pGEM-T Easy／NKG2D重组质粒，分离NKG2D片段，并插入真核表达质粒pEGFP-N1的相应限制酶位点，酶谱分析鉴定重组表达载体pEGFP-N1／NKG2D。然后经脂质体介导转染CHO细胞和YT细胞。应用荧光显微镜观测、Western blot方法和免疫组化染色对转染细胞内pEGFP-NilNKG2D的表达进行鉴定，MTF方法观察YT细胞对肿瘤细胞的杀伤功能。结果：RT-PCR扩增获得650bp基因片段，经DNA序列分析证明所获得的DNA序列与文献报道的NKG2D序列一致。转染的CHO细胞在荧光显微镜下发出强绿色荧光，Western blot分析显示重组蛋白能特异地与抗人NKG2D单克隆抗体结合；免疫组化检测显示，转染的CHO中有棕色颗粒，证明所构建的NKG2D真核表达载体可以在细胞中表达；转染NKG2D真核表达载体的YT细胞对乳腺癌细胞具有更强的杀伤效果。结论：所获得的表达NKG2D分子的真核表达载体，通过转染YT细胞，初步鉴定所表达NKG2D分子具有生物学功能，可以提高NK细胞对肿瘤细胞的杀伤活性。
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| 关 键 词： | NKG2D受体 NK细胞 基因转染 真核表达 |
| 文章编号： | 1000-484X（2005）12-0885-04 |
| 收稿时间： | 2005-01-08 |
| 修稿时间： | 2005-01-082005-04-12 |
Construction of NKG2D eukaryotic expression vector and effect on YT cell biological function |
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| XU Xiao-Qun,ZHANG Jian,ZHANG Cai,YOU Li,ZHANG Jian-Hua,LIU Jin-Sheng,WANG Jun-Fu,GAO Chun-Yi,TIAN Zhi-Gang.Construction of NKG2D eukaryotic expression vector and effect on YT cell biological function[J].Chinese Journal of Immunology,2005,21(12):885-888. |
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| Authors: | XU Xiao-Qun ZHANG Jian ZHANG Cai YOU Li ZHANG Jian-Hua LIU Jin-Sheng WANG Jun-Fu GAO Chun-Yi TIAN Zhi-Gang |
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| Institution: | Institue of Basic Medicine, Shandong Academy of Medical Science, Jinan 250062, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | NKG2D receptor NK cell Gene transfction Eukaryotic expression |
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