| 基因组不稳定肝细胞CDT1基因过表达和RNAi慢病毒载体的构建 |
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| 引用本文： | 原雅艺,党旭红,张睿凤,张忠新,任越,左雅慧.基因组不稳定肝细胞CDT1基因过表达和RNAi慢病毒载体的构建[J].山西医科大学学报,2015(2):103-107,191. |
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| 作者姓名： | 原雅艺 党旭红 张睿凤 张忠新 任越 左雅慧 |
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| 作者单位： | 中国辐射防护研究院放射医学与环境医学所 |
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| 基金项目： | 中国核工业集团公司青年科技创新团队项目 |
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| 摘 要： | 目的构建基因组不稳定细胞CDT1基因过表达和RNAi模型,为进一步探讨该基因在辐射诱发基因组不稳定的功能提供研究工具。方法根据CDT1基因信息,以慢病毒载体GV218设计合成两种重组质粒,分别包含CDT1基因全长序列以及阴性对照序列;以慢病毒载体GV248设计合成两种重组质粒,分别包含CDT1基因的小干扰序列以及用于干扰对照的阴性序列。利用Western blot和qPCR进行过表达和RNAi重组质粒表达的检测。通过转染293T细胞进行慢病毒的包装。利用ELISA和荧光法分别进行滴度的检测。再用包装好的慢病毒感染辐射诱导基因组不稳定性HL-7702肝细胞,利用qPCR检测CDT1表达量。结果测序结果表明重组质粒构建成功,并能够有效转染293T。过表达病毒滴度为4.3×108TU/ml;RNAi病毒滴度为2.0×108TU/ml。过表达慢病毒能有效上调CDT1的表达,过表达效率为65%。RNAi干扰慢病毒能够有效抑制CDT1的表达,抑制效率为88%。结论成功构建基因组不稳定肝细胞CDT1基因过表达和RNAi模型,为进一步研究CDT1在辐射诱发基因组不稳定细胞中的功能提供了有效的研究工具。
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| 关 键 词： | CDT1基因 过表达 RNAi 慢病毒载体 |
Construction of recombinant lentiviral vectors for radiation-induced genomic instability liver cells CDT1 gene overexpression and its interference RNA |
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| YUAN Yayi;DANG Xuhong;ZHANG Ruifeng;ZHANG Zhongxin;REN Yue;ZUO Yahui.Construction of recombinant lentiviral vectors for radiation-induced genomic instability liver cells CDT1 gene overexpression and its interference RNA[J].Journal of Shanxi Medical University,2015(2):103-107,191. |
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| Authors: | YUAN Yayi;DANG Xuhong;ZHANG Ruifeng;ZHANG Zhongxin;REN Yue;ZUO Yahui |
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| Institution: | YUAN Yayi;DANG Xuhong;ZHANG Ruifeng;ZHANG Zhongxin;REN Yue;ZUO Yahui;Institute of Radiology and Environmental Medicine,China Institute for Radiation Protection; |
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