促凋亡蛋白Smac和Caspase9在内毒素诱导体外肝细胞凋亡中的作用

目的 探讨内毒素致肝细胞凋亡和内毒素血症在重症肝炎发病中的作用机制.方法 培养L02肝细胞并进行传代,采用内毒素10 mg/ml分别在4小时、8小时、16小时和24小时进行刺激,并将其分为4小时、8小时、16小时和24小时组和对照组5组,采用流式细胞术和荧光染色检测肝细胞凋亡以及免疫组化法检测Smac和Caspase9的表达.结果 内毒素直接作用的L02细胞在形态学上表现出胞浆浓缩核凝聚成团块、形成凋亡小体,应用Hcechst对内毒素刺激的L02细胞进行染色并在荧光显微镜下观察,Hcechst染色显示凋亡细胞呈蓝色荧光.流式细胞仪分析内毒素刺激4小时、8小时、16小时和24小时后晚期凋亡率分别为2.3%、4.0%、6.2%和18.2%,呈进行性增高(P<0.01),与对照组晚期凋亡率(0.3%)比较有显著性差异(P<0.05),Smac和Caspase9蛋白随着刺激时间的增长表达率逐渐增高(P<0.01),与对照组比较,各刺激组Smac和Caspase9蛋白表达显著增高(P<0.05).各组Smac与Caspase9蛋白表达呈正相关关系(r=0.527,P<0.001).且Smac和Caspase9蛋白在胞浆中呈棕黄色表达.结论 内毒素在体外可以通过促凋亡蛋白Smac及增强下游通路Caspase9的活性直接诱导正常肝细胞凋亡.

The role of pro-apoptotic proteins smac and caspase9 in lipopolysaccharide-induced apoptosis of hepatocyte in vitro