摘 要: | 目的 为提高表皮生长因子(EGF)的稳定性和靶向性,利用大肠杆菌作为宿主细胞,设计和生物合成具有胰腺靶向的EGF融合蛋白。方法 使用实验室已构建的含有胰腺靶向肽TRC(CHVLWSTRC)和重组聚多肽(Pastag200)修饰EGF基因的重组质粒,将重组质粒导入大肠杆菌进行EGF融合蛋白表达,采用亲和层析等技术纯化,WesternBlot鉴定。采用小鼠胚胎成纤维细胞(NIH/3T3)和胰岛内皮细胞(MS1)测试其生物学功能。使用KM小鼠探究EGF融合蛋白体内靶向效应。结果 琼脂糖凝胶电泳和测序结果表明重组载体构建成功。WesternBlot技术验证EGF融合蛋白特异性。2种EGF融合蛋白对NIH/3T3细胞都具有一定的促增殖的能力(P<0.01),其中EGF-Pastag200-TRC表现出更高生物活性和结构稳定性,10 pg·mL-1 EGFPastag200-TRC对MS1细胞具有显著的促增殖效果。腹腔注射后,EGF-Pastag200-TRC在胰腺组织中的分布明显高于其他组织(P<0.01),证明其对胰腺组织具有靶向性。结论 经具有胰腺靶向功能多肽与可增强稳定性聚多肽...
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