视紫红质基因启动子的分离及视网膜特异表达载体的构建

目的 分离视紫红质基因启动子，构建以绿色荧光蛋白(GFP)为报告基因的视网膜特异表达载体，为今后视网膜细胞特异的靶向基因转移，特别是为视网膜疾病的基因治疗提供T具。方法 根据小鼠视紫红质基因5’端DNA顺序合成引物，通过PCR技术从小鼠基因组DNA中扩增524bp DNA片段，然后插入质粒pEGFP-1GFP编码基因上游的多克隆位点处，构建表达载体pmRho-EGFP。采用脂质体包裹pmRho-EGFP，转染体外培养的人视网膜色素上皮(RPE)细胞及其他来源的细胞；注射到SD大鼠视网膜下或玻璃体腔内；或通过电穿孔直接转移到RCS大鼠腓肠肌内。GFP表达采用荧光显微镜观察。结果 pmRho-EGFP在体外培养的人RPE细胞中的表达水平明显高于其他组织来源的细胞；体内转染实验证明pmRho-EGFP可在大鼠视网膜神经细胞中表达，但在大鼠腓肠肌中不表达。结论 小鼠视紫红质基因5’端524hp片段具有基本的启动子活性，能够调控基因在视网膜神经细胞及色素上皮细胞中表达，并具有一定的组织和细胞特异性。

Isolation of the rhodopsin gene promoter and construction of a retina-specific expression vector