人乳头瘤病毒16例E5转化基因的克隆及原核表达

目的 建立人乳头瘤病毒16型E5基因的无性繁殖系，为进一步研究其致癌机理作准备。方法 用PCR人HPV16质粒DNA中扩增出E5基因序列，连接到pGEM－T载体。将阳性的重组pGEM－T用BamHI/EcoR双酶切并回收目的片段连接到原核表达载体pGEX－2T，转化DH5α菌株。取工程菌，TPTG诱导表达，SDS－PAGE电泳鉴定。结果 ①经PCR、测序和双酶切鉴定，认为HPV16E5正确插入上述表达载体，建立了该转化基因的无性繁系。②经IPTG诱导的pGEX－2T－E5质粒表达出约42KD的融合蛋白，分析含有约16KDHPV16E5蛋白，与预期含HPV16E5的融合蛋白分子量相符。结论 ①采用PCR克隆技术，扩增HPV16E5转化基因目的片段，将其克隆到pGEM－T载体在国内首次建立了HPV16E5转化基因的无性繁殖子。②成功构建HPV16E5基因的原核表达质粒，并表达出GST－35融合表达蛋白。