| NELL2基因真核表达载体和microRNA干扰质粒的构建及其体外干预效应的研究 |
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| 引用本文： | 周莎莎,李嫔.NELL2基因真核表达载体和microRNA干扰质粒的构建及其体外干预效应的研究[J].上海交通大学学报(医学版),2011,31(2):177-181. |
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| 作者姓名： | 周莎莎 李嫔 |
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| 作者单位： | 上海市儿童医院,上海交通大学附属儿童医院内分泌科,上海,200040 |
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| 基金项目： | 上海市卫生局基金，上海申康医院发展中心资助项目 |
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| 摘 要： | 目的构建大鼠NELL2基因真核表达载体pcDNA3.1(-)-NELL2的microRNA(miRNA)干扰质粒,观察其转染体外细胞系后对NELL2 mRNA表达的干预效应。方法从SD大鼠下丘脑组织中提取总RNA,设计特异性引物,采用RT-PCR技术扩增NELL2基因全长cDNA,利用T载体将目的片段克隆至表达载体pcDNA3.1(-),得到重组质粒pcDNA3.1(-)-NELL2。针对NELL2基因分别设计4对pre-miRNA序列,通过T4连接酶克隆至pcDNA6.2-GW/EmGFP-miRNA表达载体构建干扰质粒(p-NELL2-miRNA1～4)。将p-NELL2-miRNA1～4分别与pcDNA3.1(-)-NELL2共转染人胚肾细胞系(HEK293)(p-NELL2-miRNA1～4干预组),采用Real-Time PCR技术检测转染后48 h细胞NELL2 mRNA表达;以转染pcDNA3.1(-)-NELL2细胞作为阳性对照组,以共转染pcDNA3.1(-)-NELL2和阴性对照干扰质粒pre-miRNA-neg细胞作为阴性对照组。结果酶切和测序鉴定结果表明:重组质粒pcDNA3.1(-)...
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| 关 键 词： | NELL2 microRNA 真核表达载体 人胚肾细胞系 |
Construction of eukaryotic expression vector and microRNA expression plasmid of NELL2 gene and their biological effects in vitro |
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| ZHOU Sha-sha,LI Pin.Construction of eukaryotic expression vector and microRNA expression plasmid of NELL2 gene and their biological effects in vitro[J].Journal of Shanghai Jiaotong University:Medical Science,2011,31(2):177-181. |
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| Authors: | ZHOU Sha-sha LI Pin |
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| Institution: | (Department of Endocrinology,Shanghai Children’s Hospital,Shanghai Jiaotong University,Shanghai200040,China) |
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