梅毒螺旋体膜蛋白Tp92真核表达重组体的构建及其表达鉴定

目的 以梅毒螺旋体(Trepondmapallidum，Tp)外膜蛋白基因Tp92为目的基因，构建Tp真核表达重组体pcDNA3．1( )-Tp92，并鉴定其在Hela细胞能否正确表达，为进一步开展TpDNA疫苗动物实验打下基础。方法 应用PCR技术从TpNichols株基因组模板中扩增Tp92基因，定向克隆构建真核表达重组体pcDNA3．1( )-Tp92，脂质体介导将pcDNA3．1( )-Tp92转染入Hela细胞，以免疫酶标法和一步法RT～PCR检测pcDNA3．1( )Tp92在Hela细胞中的表达情况。结果 双酶切及测序鉴定证明成功构建Tp真核表达重组体pcDNA3．1( )-Tp92，DNA测序显示重组质粒含有2103bp的目的基因片段，读码框架正确，无碱基错配及移码突变。测序后结果经与GenBank登录的序列做blast比较，载体上所连目的基因片段序列与GenBank登录的Nichols株Tp92基因序列完全一致，同其他病原性密螺旋体菌株登陆序列比较同源度为95．5％～100％，证实本研究所得到的基因为所需基因，同时也表明该基因为Tp的保守性基因。免疫酶标法结果显示该重组体在Hela细胞能有效表达目的蛋白与梅毒阳性标准血清中相应抗体反应；RT-PCR检测结果显示RT-PCR扩增产物与Tp92基因片段大小相符，确实源于重组质粒转录后的mRNA。结论 TD真核表达重组体pcDNA3．1( )-Tp92的成功构建及在体外真核细胞中的有效表达，为进一步研制梅毒DNA疫苗及其生物学功能的研究奠定了一定的实验基础。

A Construction of Eucaryotic Expression Vector for Outer Membrane Protein Tp92 from Treponema Pallidum and its Expression in Hela Cells