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| Smoothened慢病毒干扰载体的构建及其对人牙周膜干细胞增殖与分化的影响 | |
| 引用本文： | 张洁,常慧君,李雨轩,舒绍兵,罗金英,徐志玲,汤玲,杨彦春,周继祥. Smoothened慢病毒干扰载体的构建及其对人牙周膜干细胞增殖与分化的影响[J]. 第三军医大学学报, 2013, 35(11): 1133-1136 |
| 作者姓名： | 张洁 常慧君 李雨轩 舒绍兵 罗金英 徐志玲 汤玲 杨彦春 周继祥 |
| 作者单位： | 1. 第三军医大学西南医院口腔科,重庆,400038 2. 四川省军区门诊部口腔科,成都,610041 3. 德阳市第二人民医院口腔科,四川德阳,618000 4. 400038重庆,第三军医大学西南医院口腔科;401147重庆,武警重庆总队机关门诊部口腔科 5. 重庆大学生物医学工程学院,重庆,400044 |
| 摘 要： | 目的 体外构建及筛选人Smoothened(SMO)基因的慢病毒干扰载体,使用此载体下调人牙周膜干细胞(human periodontal ligament stem ceils,PDLSCs)中SMO基因表达并检测其对细胞增殖与分化的影响.方法 针对人SMO 基因设计3条干扰序列,构建RNA干扰慢病毒载体,在293FT细胞中包装病毒液并转染293A细胞,通过实时荧光定量PCR检测干扰效率,得到具有最佳干扰效率的病毒后,转染PDLSCs,用Western blot检测其对PDLSCs中SMO基因的干扰效果及对细胞分化的影响,CCK-8法检测其对PDLSCs增殖的影响.结果 成功构建3个SMO慢病毒干扰载体(pGP-SMO1、pGP-SMO2、pGP-SMO3),通过转染293A细胞并进行实时荧光定量PCR检测后,得到pGP-SMO1具有最佳干扰效率,转染后SMO mRNA水平下降到对照的(28.5±2.5)％.利用此病毒能够很好地转染体外培养的PDLSCs,并使PDLSCs中SMO蛋白水平下降80％.进一步检测细胞增殖发现,与未转染组比较,SMO下调后PDLSCs增殖变慢[(1.09±0.20) vs (1.86±0.21),P＜0.01].同时也导致成骨分化标志物Runx2的蛋白表达下调.结论 利用慢病毒介导的干扰病毒载体成功干扰了PDLSCs SMO基因的表达,SMO基因的下调会导致PDLSCs增殖减慢,成骨分化能力减弱. |
| 关 键 词： | Smoothened RNA干扰 慢病毒 人牙周膜干细胞 |
Construction of lentiviral RNAi vectors containing human smoothened gene and its inhibitory effect on proliferation and differentiation in human periodontal ligament stem cells |
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| Abstract: | |
| Keywords: | smoothened RNA interference lentivirus human periodontal ligament stem cells |
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