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| 大鼠成纤维细胞生长因子2分子克隆及其真核表达载体的构建 | |
| 引用本文： | 杨丽华,张学光,王如兴,陈永井,吕海军,张燕,李肖蓉. 大鼠成纤维细胞生长因子2分子克隆及其真核表达载体的构建[J]. 中国组织工程研究与临床康复, 2008, 12(15): 2875-2878 |
| 作者姓名： | 杨丽华 张学光 王如兴 陈永井 吕海军 张燕 李肖蓉 |
| 作者单位： | 1. 苏州大学医学生物技术研究所江苏省干细胞重点实验室,江苏省苏州市,215007 2. 无锡市第一人民医院心内科,江苏省无锡市,214002 |
| 基金项目： | 江苏省卫生厅医学重点实验室开放课题 |
| 摘 要： | 目的:实验旨在克隆大鼠成纤维细胞生长因子2CDS区基因全长,并将其于真核表达载体PIRES2-EGFP相连接,构建成纤维细胞生长因子2的真核表达载体.方法:实验于2007-03/06在苏州大学生物技术研究所完成.①实验材料:克隆载体PMD18-T-vector(takara):真核表达载体PIRES2-EGFP由苏州大学第一附属医院消化科叶建新博士惠赠:大肠杆菌TOP10购自英俊公司:清洁级新生一两天SD大鼠2只.②实验过程及评估:体外分离培养新生SD大鼠心室肌细胞.Trizol法抽提心室肌细胞总mRNA,采用反转录-聚合酶链反应的方法反转录获得总的cDNA,聚合酶链反应的方法扩增成纤维细胞生长因子2基因的CDS区片断全长.将扩增出来的基因片断和克隆载体PMD18-T-vector连接,转化TOP10感受态细菌,阳性克隆经电泳,质粒聚合酶链反应和酶切等鉴定正确后送去测序确认.测序正确后抽重组质粒,bgl Ⅱ和pst Ⅰ同时双酶切PMD18-T-FGF-2和PIRES2-EGFP,将切下的目的基因片段和线性PIRES2-EGFP空质粒载体在T4DNA连接酶作用下进行连接,构建其真核表达载体.结果:①成功培养出了形态典型的SD大鼠的心室肌细胞.②所获的大鼠成纤维细胞生长因子2DNA序列与GeneBank中收录的大鼠成纤维细胞生长因子2序列完全一致.③PIRES2-EGFP-bFGF真核表达载体的构建测序表明,成纤维生长因子2成功插入真核表达载体PIRES2-EGFP之中.结论:实验成功克隆了大鼠成纤维细胞生长因子2基因全长,并构建了其真核表达载体.为转基因细胞制备和移植治疗心肌梗死奠定基础. |
| 关 键 词： | 成纤维细胞生长因子2 心肌/细胞学 载体构建 大鼠 组织构建 大鼠 纤维细胞生长因子 分子克隆 真核 表达载体的构建 vector cell construction growth fibroblast 心肌梗死 移植治疗 转基因 并构 成纤维生长因子 完全 收录 序列 形态 培养 |
| 文章编号： | 1673-8225(2008)15-02875-04 |
| 修稿时间： | 2007-09-05 |
Cloning of fibroblast growth factor-2 and construction of its eukaryotic cell expressing vector |
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| Yang Li-hua,Zhang Xue-guang,Wang Ru-xing,Chen Yong-jing,Lü Hai-jun,Zhang Yan,Li Xiao-rong. Cloning of fibroblast growth factor-2 and construction of its eukaryotic cell expressing vector[J]. Journal of Clinical Rehabilitative Tissue Engineering Research, 2008, 12(15): 2875-2878 | |
| Authors: | Yang Li-hua Zhang Xue-guang Wang Ru-xing Chen Yong-jing Lü Hai-jun Zhang Yan Li Xiao-rong |
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