MicroRNA-582-5p在HBV感染中的作用及分子机制研究

目的　探究微小RNA-582-5p（microRNA-582-5p, miR-582-5p）在HBV感染中的作用及分子机制。方法　通过miRNA芯片筛选出miR-582-5p作为研究对象。分别通过过表达和抑制内源性miR-582-5p表达的方法，研究其对HBV DNA、HBV RNA、HBeAg、HBsAg等HBV复制和表达相关指标的影响。在分子机制研究中，双荧光素酶报告基因检测miR-582-5p对HBV启动子和增强子的影响，生物信息学预测miR-582-5p的靶基因，分别使用实时定量PCR（quantitative real-time PCR, qRT-PCR）和Western blot检测miR-582-5p对靶基因NOTCH1 mRNA和蛋白表达的影响。最后检测HBV相关蛋白表达对miR-582-5p的影响。结果　qRT-PCR结果表明miR-582-5p随着HBV复制水平升高而逐渐降低。miR-582-5p抑制HBV DNA、HBV RNA、HBeAg和HBsAg的表达。miR-582-5p能抑制HBV S2 promoter和HBV EnhancerⅠ的活性，miR-582-5p能直接靶向HBV促进因子NOTCH1，抑制其mRNA和蛋白表达。HBx蛋白抑制miR-582-5p的表达。结论　miR-582-5p通过抑制HBV S2 promoter和HBV EnhancerⅠ的活性或靶向抑制HBV促进因子NOTCH1而抑制HBV复制和表达；同时，HBV的复制与表达抑制miR-582-5p的表达。

Function and molecular mechanism of microRNA-582-5p in HBV infection