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| 肠道病毒71型病毒样颗粒在汉逊酵母中的表达 | |
| 引用本文： | 顾美荣,宋琳琳,许珊珊,付作申,林福玉,张现臣,魏文进,贾士儒. 肠道病毒71型病毒样颗粒在汉逊酵母中的表达[J]. 中华微生物学和免疫学杂志, 2013, 0(8) |
| 作者姓名： | 顾美荣 宋琳琳 许珊珊 付作申 林福玉 张现臣 魏文进 贾士儒 |
| 作者单位： | 1. 300457 天津科技大学生物工程学院; 102600 北京民海生物科技有限公司研发中心 2. 102600,北京民海生物科技有限公司研发中心 3. 300457,天津科技大学生物工程学院 |
| 基金项目： | 国家高技术研究与发展计划(863计划) |
| 摘 要： | 目的应用汉逊酵母表达系统进行肠道病毒71型（EV71）病毒样颗粒（VLP）的表达。方法将经过汉逊酵母密码子优化的人EV71的 P1和3CD基因片段克隆到汉逊酵母表达载体PMV上，获得重组表达质粒PMV-P1-3CD，转化汉逊酵母宿主菌AU0501，PCR方法及稳定传代培养筛选整合P1和3 CD基因的重组菌株。重组菌种接种在含有1％甲醇的培养基中进行诱导表达，对表达产物进行SDS-PAGE、Western blot检测。挑选优胜表达菌株进行30 L发酵罐发酵培养，发酵产物经过粗略纯化后进行电镜分析。结果筛选获得EV71重组表达菌株；SDS-PAGE检测结果显示在相对分子质量（Mr）为26×103、33×103、35×103处有明显的VP3、VP1、VP0蛋白条带，Mr 大小与预期的目的蛋白大小一致；Western blot检测结果显示表达产物与EV71-VP1单克隆抗体在M r 为33×103处有较为明显的VP1反应条带，表达产物具有良好的免疫反应性；表达菌株发酵表达量可达200 mg/L，电镜分析可见24～30 nm的VLP，且颗粒结构完好。结论应用汉逊酵母表达系统成功表达了EV71 VLP，为今后研制EV71 VLP疫苗奠定基础。 |
| 关 键 词： | 肠道病毒71型 汉逊酵母 病毒样颗粒 表达 |
Expression of virus-like particles of enterovirus 71 in Hansenula polymorpha |
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| GU Mei-rong,SONG Lin-lin,XU Shan-shan,FU Zuo-shen,LIN Fu-yu,ZHANG Xian-chen,WEI Wen-jin,JIA Shi-ru. Expression of virus-like particles of enterovirus 71 in Hansenula polymorpha[J]. Chinese Journal of Microbiology and Immunology, 2013, 0(8) | |
| Authors: | GU Mei-rong SONG Lin-lin XU Shan-shan FU Zuo-shen LIN Fu-yu ZHANG Xian-chen WEI Wen-jin JIA Shi-ru |
| Abstract: | |
| Keywords: | Enterovirus 71 Hansenula polymorpha Virus-like particle Expression |
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