旋毛虫原肌球蛋白的特性分析及原核表达北大核心CSCD

目的 分析旋毛虫(Trichinella spiralis)的原肌球蛋白(Tropomyosin,TM)特性并制备重组旋毛虫TM蛋白。方法 在NCBI的Nucleotide数据库选取旋毛虫TM (GenBank:AF419300.1),利用在线分析工具分析旋毛虫TM的氨基酸组成、二级/三级结构、疏水性等特性。密码子优化后合成旋毛虫TM(GenBank:AF419300.1)的全长并插入到原核表达载体pET-28a(+),构建重组原核表达质粒pET-28a(+)-TM,转化至BL21(DE3)中,以终浓度为0.5 mmol/L的IPTG诱导旋毛虫TM的表达,纯化后采用Western blot法对重组旋毛虫TM蛋白进行鉴定。结果 旋毛虫TM为亲水性不稳定蛋白,二级结构以α-螺旋为主,无复杂的空间结构。构建的重组原核质粒pET-28a(+)-TM经双酶切得到867 bp的基因片段,序列测定后证实重组原核质粒pET-28a(+)-TM构建正确。经IPTG诱导的菌体超声混悬液、离心后上清均检测到相对分子质量约40×10~3的目的蛋白,纯化后得到条带单一的旋毛虫TM。Western bolt显示纯化的重组旋毛虫TM具有良好的反应原性,能被相应抗体识别。结论 获得具有反应原性的纯化的重组旋毛虫TM,该蛋白为亲水性不稳定蛋白,无复杂空间结构,为进一步研究旋毛虫TM蛋白的生物学功能奠定了基础。