| 摘 要： | ![]()
目的探讨冰冻不同时间对弓形虫GT1速殖子体外感染力的影响。方法用HFF细胞传代GT1速殖子3次,刮净培养物,取2.0 mL充分破碎后计数。将剩余培养物中速殖子调至10000个/mL,分装至1.5 mL离心管(100μL/管),并随机分成3组。上述样品放置于4℃,分别在0、12、24、36、48、60 h时取出样品,5管/组,再置于4℃、-20℃或-80℃保存。待首批冰冻72 h时取出全部样品,于室温(约22℃)完全融化后全量加入预先铺有HFF细胞的6孔培养板内,继续培养。于10倍物镜下随机选取3个视野,观察并记录感染3、5、7 d时的噬斑形成数,若噬斑总数为0,则进行全视野扫描检测。盲传感染7 d仍未检测到噬斑形成的培养物,用全视野扫描盲传7 d时各瓶内的噬斑。结果随机观察3个视野,复苏前4℃放置的GT1速殖子仅在感染3 d时形成的噬斑清晰可辨,且各孔间无明显不同;-20℃和-80℃冰冻均能减弱GT1速殖子的体外感染力。盲传后观察,经-20℃和-80℃冰冻24 h的GT1速殖子仍能在感染HFF细胞7 d时形成噬斑,且-80℃较-20℃冰冻组形成的噬斑数更多;冰冻36 h及以上的GT1速殖子未形成噬斑。结论以1000个速殖子/孔的剂量感染6孔培养板内的HFF细胞,4℃放置不超过72 h对GT1速殖子体外毒力无显著影响,-20℃或-80℃冰冻36 h及以上能减弱弓形虫GT1速殖子体外感染力。
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