新型冠状病毒RDRP的原核表达、多克隆抗体制备及生物信息学分析北大核心CSCD |
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引用本文: | 陈柯,闫硕,宋桃花,高岩,杜昆朋,郑皖怿,伊正君,付玉荣.新型冠状病毒RDRP的原核表达、多克隆抗体制备及生物信息学分析北大核心CSCD[J].中国病原生物学杂志,2022(1):9-13. |
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作者姓名: | 陈柯 闫硕 宋桃花 高岩 杜昆朋 郑皖怿 伊正君 付玉荣 |
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作者单位: | 1.潍坊医学院基础医学院261053;2.潍坊医学院医学检验学院; |
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基金项目: | 山东省自然科学基金重大基础研究项目(No.ZR2018ZC1054)。 |
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摘 要: | 目的应用原核表达系统制备重组新型冠状病毒依赖RNA的RNA聚合酶(RNA-dependent RNA polymerase,RDRP),纯化后免疫新西兰大白兔获得高效价多克隆抗体,并对RDRP进行生物信息学分析。方法鉴定正确的pET-22b RDRP质粒转化表达载体,诱导表达RDRP蛋白,纯化后免疫大白兔,间接ELISA法检测其多克隆抗体效价。运用Expasy PortParam、SWISS MODEL等生物信息学软件对RDRP蛋白的等电点、分子质量、亲疏水性等理化性质、蛋白的空间结构、跨膜结构域、磷酸化位点、蛋白信号肽进行预测;构建系统进化树,进行亲缘性分析。结果pET-22b RDRP重组质粒酶切鉴定正确,经诱导重组蛋白以包涵体的形式表达,8 mol/L尿素梯度复性后得到纯度高的RDRP蛋白。用纯化蛋白免疫大白兔,间接ELISA检测血清抗体效价>1∶256000,Western blot检测抗体具有良好特异性。经生物信息学分析RDRP蛋白为亲水性,非跨膜蛋白,且无信号肽。11种病毒系统进化树显示,SARS-CoV-2 RDRP蛋白与SARS-CoV RDRP亲缘关系较近。结论成功获得重组SARS-CoV-2 RDRP蛋白,用该蛋白免疫大白兔能刺激产生高效价的多克隆抗体。预测与SARS-CoV RDRP亲缘关系较近,为亲水性非跨膜蛋白,为研究SARS-CoV-2 RDRP蛋白的生物学功能及其疫苗的制备奠定了基础。
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关 键 词: | 新型冠状病毒 依赖RNA的RNA聚合酶 原核表达 多克隆抗体 |
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