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羊布鲁杆菌M5-90 BP26抗原单克隆抗体的制备及鉴定
引用本文:丘金浪,吴静波,黎诚耀,王文敬. 羊布鲁杆菌M5-90 BP26抗原单克隆抗体的制备及鉴定[J]. 中国地方病学杂志, 2012, 31(4)
作者姓名:丘金浪  吴静波  黎诚耀  王文敬
作者单位:南方医科大学输血医学研究所, 广州,510515
基金项目:国家自然科学基金,国家973计划
摘    要:目的 制备高亲和性的羊布鲁杆菌M5-90 BP26抗原单克隆抗体,并对抗体进行鉴定.方法 将质粒pET-28a-BP26转化感受态大肠埃希菌(E.coli)BL21 (DE3),构建原核表达质粒pET-28a-BP26,用镍离子金属螯合亲和层析法(Ni-NTA)纯化、重组BP26蛋白(rBP26).将纯化后的rBP26蛋白与弗氏完全佐剂等体积混合成乳化抗原,接每只100 μg/0.1 ml在BALB/c小鼠皮下多点注射进行初次免疫;2周后,按每只50μg/0.1ml 在小鼠皮下多点注射进行再次免疫.再次免疫后2周,小鼠尾静脉取血测效价,检测免疫效果;在细胞融合前3天,将乳化抗原按每只小鼠50μg腹腔注射加强免疫.将小鼠骨髓瘤SP2/0细胞与脾细胞按1∶5比例在聚乙二醇( PEG) 1450作用下进行细胞融合,置于37℃、5%CO2培养箱中培养;10 d后取细胞培养上清液,用间接酶联免疫吸附法(ELISA)测定,筛选分泌抗rBP26抗体的杂交瘤细胞;再经过反复3次克隆,筛选出单克隆全阳性的杂交瘤细胞建株,用杂交瘤细胞株制备BP26抗原单克隆抗体,并以初始杂交瘤细胞克隆导命名.利用羊布鲁杆菌M5 -90疫苗株制备膜蛋白提取物(NMP),采用免疫印迹法(Western)及斑点间接酶联免疫吸附法(Dot-ELISA)对筛选的单克隆抗体进行免疫学特性鉴定,用单克隆抗体亚型试剂盒进行抗体分型和Kappa (κ)和Lambda(λ)轻链鉴定.结果 成功地获得2株能稳定分泌抗rBP26抗原的高亲和性杂交瘤3C3和5A5单克隆抗体,并能与羊布鲁杆菌M5-90疫苗株上的NMP结合,构建成M5-90 BP26抗原单克隆抗体,抗体亚型分别为IgG1和IgG2b,轻链均为κ链.结论 鉴定结果表明,成功制备2株羊布鲁杆菌BP26抗原的高亲和性单克隆抗体,抗体具有识别M5-90疫苗株的膜蛋白构象表位的能力,优势表位的识别可为羊布鲁杆菌M5-90疫苗株的改造提供实验依据.

关 键 词:布鲁杆菌,羊  膜间质蛋白BP26  抗体,单克隆

Preparation and characterization of monoclonal antibodies against BP26 protein of Brucella melitensis M5-90
QIU Jin-lang , WU Jing-bo , LI Cheng-yao , WANG Wen-jing. Preparation and characterization of monoclonal antibodies against BP26 protein of Brucella melitensis M5-90[J]. Chinese Jouranl of Endemiology, 2012, 31(4)
Authors:QIU Jin-lang    WU Jing-bo    LI Cheng-yao    WANG Wen-jing
Abstract:
Keywords:Brucella melitensis  Periplasmic protein BP26  Antibodies,monoclonal
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