人牙髓细胞Smad2基因MH2结构域的cDNA 克隆和序列测定

目的：从人牙髓细胞内克隆转化生长因子－β特异的细胞内信号转导基因Ｓｍａｄ２的功能性结构域———ＭＨ２结构域。方法：原代培养人牙髓细胞，从培养的细胞中提取总ＲＮＡ，逆转录合成ｃＤＮＡ第１条链；设计内、外侧两对引物，进行巢式ＰＣＲ，扩增Ｓｍａｄ２基因ＭＨ２结构域的基因片段；将所获得的基因片段定向插入ｐＢｌｕｓｃｒｉｐｔⅡＳＫ（＋）载体；转化大肠杆菌ＪＭ１０９，挑选阳性克隆并鉴定；用ＰＥ３１７－Ａ型自动测序仪进行核苷酸序列测定分析。结果：测序结果与国外从人肾ｃＤＮＡ文库中克隆的基因序列完全一致。结论：首次从人牙髓细胞中克隆成功Ｓｍａｄ２基因的ＭＨ２结构域，证实了Ｓｍａｄ２基因在人牙髓细胞中的表达；提示人牙髓细胞内存在Ｓｍａｄ２信号转导途径，ＴＧＦ－β对人牙髓细胞分化的调节可能是通过Ｓｍａｄ２信号转导途径实现的。

cDNA cloning and sequencing of MH2 domain of Smad2from human dental pulp cells