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| 体外靶向TP53BP2基因shRNA慢病毒载体的构建及功能鉴定 | |
| 作者姓名： | 霍云飞 寇卜心 柴梦音 豆双双 高明慧 石英 刘晓霓 |
| 作者单位： | 首都医科大学附属北京佑安医院北京肝病研究所 |
| 基金项目： | 北京市自然科学基金资助项目(编号：7192084); |
| 摘 要： | 目的 本研究旨在构建靶向肿瘤蛋白p53结合蛋白2(TP53BP2)基因的短发夹RNA(shRNA)慢病毒载体,以抑制肝癌细胞TP53BP2的表达。方法 设计了2对针对TP53BP2基因的RNA干扰序列,并合成相应的shRNA序列。shRNA退火形成双链oligo序列后,应用基因重组技术构建重组质粒,经菌落PCR和测序鉴定,将重组正确的质粒进行慢病毒包装和滴度测定,并采用Western Blot、qRT-PCR和激光共聚焦技术观察慢病毒Lenti-shTP53BP2对HepG2细胞TP53BP2基因的干扰效果。结果 测序比对结果显示,各重组慢病毒载体与设计参考序列一致,提示各重组慢病毒体构建成功;重组慢病毒载体经慢病毒包装后,显示pHS-ASR-LW429、pHS-ASR-LW512和pHS-ASR-LW513的滴度分别为9.7×108 TU/mL、6.1×108 TU/mL和6.4×108 TU/mL;用慢病毒Lenti-shTP53BP2(pHS-ASR-LW512和pHS-ASR-LW513)感染HepG2细胞后,与... |
| 关 键 词： | HepG2细胞 肿瘤蛋白p53结合蛋白2 短发夹RNA 慢病毒 体外 |