| 利用PCR方法获得shRNA抑制内外源性基因的表达 |
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| 引用本文： | 洪权,吴镝,陈香美,冯哲,孙学峰,张雪光.利用PCR方法获得shRNA抑制内外源性基因的表达[J].解放军医学杂志,2005,30(9):800-803. |
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| 作者姓名： | 洪权 吴镝 陈香美 冯哲 孙学峰 张雪光 |
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| 作者单位： | 100853,北京,解放军总医院肾病中心暨肾病重点实验室 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金（编号30370655）和国家“973”项目（编号G2000057000）资助课题 |
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| 摘 要： | 目的探讨PCR法获得的shRNA对外源性基因和内源性基因表达的抑制效果。方法选择绿色荧光蛋白(GFP)和大鼠肾脏系膜细胞高丰度表达的纤维连接蛋白(FN)分别作为外源性和内源性基因的靶基因,设计特异性引物,利用PCR扩增获得shGFPRNA和shFNRNA。前者与pEGFP质粒共转染至293T细胞,48h后进行激光共聚焦检测细胞表达GFP阳性率;后者转染至大鼠系膜细胞(RMC)中,48h后提取总RNA逆转录成cDNA,经realtimeRTPCR检测FN的mRNA表达水平,提取细胞总蛋白进行Westernblot检测FN蛋白表达水平。结果PCR获得的shGFPRNA产物能有效抑制外源性基因GFP的表达,抑制效率可达70%±3.2%;shRNA转染组内源性基因FN的表达水平明显下降,与对照组相比有显著性差异(P<0.05)。结论PCR方法可快速简单、廉价地获得shRNA,对内源性或外源性基因进行特异性抑制。
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| 关 键 词： | RNAi，小分子干扰 聚合酶链反应 纤连蛋白类 |
| 收稿时间： | 2005-04-18 |
| 修稿时间： | 2005-07-15 |
Suppression of the expression of exo- or endogenous genes by shRNA with the aid of PCR |
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| Hong Quan,Wu Di,Chen Xiangmei et al. Kidney Center and Key Laboratory of Chinese PLA,General Hospital of PLA,Beijing ,China.Suppression of the expression of exo- or endogenous genes by shRNA with the aid of PCR[J].Medical Journal of Chinese People's Liberation Army,2005,30(9):800-803. |
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| Authors: | Hong Quan Wu Di Chen Xiangmei Kidney Center and Key Laboratory of Chinese PLA General Hospital of PLA Beijing China |
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| Institution: | Hong Quan,Wu Di,Chen Xiangmei et al. Kidney Center and Key Laboratory of Chinese PLA,General Hospital of PLA,Beijing 100853,China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | RNA small interfering polymerase chain reaction fibronectins |
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