| 基于CRISPR/Cas9技术PCSK9基因敲除小鼠模型的构建及表型验证 |
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| 作者姓名： | 托罗娜依·米吉提 陈小翠 崔元峰 阿比旦·阿卜杜如苏力 陈邦党 马秀敏 |
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| 作者单位： | 1. 新疆医科大学附属肿瘤医院医学检验中心;2. 新疆医科大学基础医学院;3. 新疆医科大学第一附属医院临床医学研究院 |
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| 基金项目： | 新疆维吾尔自治区自然科学基金青年基金项目(2017D01C346)； |
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| 摘 要： | 目的 基于CRISPR/Cas9技术构建前枯草杆菌蛋白原转换酶9(Preprotein convertase subtilisin/kexin type9,PCSK9)基因敲除小鼠模型并对其表型进行初步验证。方法 利用非同源末端连接(NHEJ)修复引入突变的方式，针对PCSK9基因靶序列设计单链向导RNA(sgRNA),将sgRNA和Cas9 mRNA显微注射到C57BL/6J小鼠受精卵，获得F0代敲除小鼠，通过繁育及基因型鉴定获得PCSK9基因敲除(PCSK9 KO)纯合子小鼠。采用PCR方法对PCSK9 KO小鼠进行基因鉴定，Western Blot检测肝组织PCSK9及低密度脂蛋白受体(LDL-R)蛋白的表达，同时检测心、脑、肾、脂肪组织中的PCSK9蛋白表达水平，q-PCR检测PCSK9的mRNA表达水平。采用酶法检测血清中总胆固醇(TC)及甘油三酯(TG)水平。结果 PCR产物凝胶电泳以及PCSK9蛋白及mRNA表达结果表明成功获得全身性PCSK9基因敲除小鼠，肝组织LDL-R(3.42±0.56)蛋白表达显著增高。与WT组相比，PCSK9小鼠血清TC(90.75±17.81...
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| 关 键 词： | CRISPR/Cas9 PCSK9 基因敲除 基因型鉴定 血脂水平 |
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