干扰和过表达热休克转录因子2对肠上皮细胞炎症的影响

【摘要】 目的 通过脂质体法干扰和过表达肠上皮细胞的热休克转录因子2（heat shock factor 2,HSF2）,探讨其对肠上皮细胞炎症反应的影响和涉及的信号通路,为溃疡性结肠炎发病机制及诊治靶点提供线索。方法 选取结肠肿瘤上皮细胞Caco 2作为研究材料,采用脂质体法分别转染HSF2 siRNA和pCMV HSF2 FLAG重组质粒,四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测转染前后细胞生理特性的变化;并用脂多糖（LPS）刺激转染组及对照组细胞,Griess Reagent System 测定各组细胞的NO浓度;RT PCR检测细胞炎性酶iNOS、COX 2,炎症因子TNF α、IL 8mRNA转录水平;ELISA检测细胞培养基中TNF α、IL 8含量;Western Blot检测COX 2、IκB、NF κB p65蛋白水平,以及 ERK1/2、JNK和p38磷酸化水平。结果 MTT法检测结果显示,脂质体法转染入siRNA或重组质粒对细胞活性无显著影响;干扰HSF2后,LPS刺激Caco 2产生iNOS、COX 2、TNF α及IL 8,在mRNA和蛋白水平均较对照组表达上调（P＜0.05）,这一过程中信号通路IκB表达降低,而NF κB p65表达升高,MAPK中ERK1/2磷酸化水平降低,而JNK和p38则呈增强趋势。转染入重组质粒过表达HSF2后,结果则相反。结论 HSF2通过增强ERK1/2蛋白磷酸化水平,抑制JNK、P38及NF κB表达,能有效抑制LPS引起Caco 2细胞的炎性酶及炎性因子的表达,在炎症反应中起保护性作用,对研究溃疡性结肠炎的发病机制提供线索,可能成为其治疗新的靶点。