Alarelin免疫绵羊对垂体GnRHR、FSHR和LHR基因表达与生殖激素分泌的作用

 目的 探讨GnRHago主动免疫对绵羊腺垂体GnRHR、FSHR和LHR表达及生殖激素合成与释放作用，为深入研究GnRH-A调节生殖功能的机理及合理应用提供依据。方法 42只5-6月龄母绵羊（Ovis aries）随机分为6组（n =7），EG-Ⅰ、EG-Ⅱ和EG-Ⅲ分别皮下注射阿拉瑞林抗原200μg、300μg和400μg，0d和14d各1次，共2次；EG-Ⅳ和EG-Ⅴ分别皮下注射阿拉瑞林抗原200μg、300μg，0d、7d、14d和21d各1次，共4次；对照组皮下注射药物的溶媒，0d和14d各1次，共2次。于70d在颈动脉放血处死绵羊，无菌切取腺垂体、子宫及卵巢。用ELISA测定血清GnRH抗体浓度，以激素检测试剂盒分别测定血清GnRH、FSH、LH和E2浓度。提取腺垂体总RNA，PCR扩增与反转录，实时荧光定量PCR（FQ-PCR），分析GnRHR、FSHR和LHR mRNA的表达。 结果 绵羊腺垂体中有丰富的RNA。特异性条带扩分别为2150 bp，1100bp和180bp左右。实验组GnRHR、FSHR和LHR mRNA值均低于对照组，EG-Ⅳ和EG-Ⅴ的mRNA值低于EG-Ⅰ和EG-Ⅱ。实验组血清GnRH浓度逐渐降低值谷值，之后上升，70d 时达到免疫注射前水平。实验组血清FSH浓度始终高于对照组（P＜0.05）。35d时EG-Ⅳ和EG-Ⅴ低于EG-Ⅰ、EG-Ⅱ和EG-Ⅲ。实验组和对照组血清E2含量无显著差异。结论 阿拉瑞林主动免疫可抑制垂体GnRHR mRNA、FSHR mRNA和LHR mRNA的表达，促进垂体合成与释放FSH，增加血清FSH含量，降低GnRH和LH浓度，对E2浓度无明显影响。增加阿拉瑞林抗原的免疫剂量和注射次数，作用更加明显。

Alarelin active immunization affects expressions of GnRHR, FSHR and LHR mRNAs in the pituitary gland and reproductive hormone secretion of ewes