四种血清型登革病毒包膜蛋白结构域Ⅲ(EDⅢ)中和抗体的制备及鉴定

目的 制备四种血清型交叉反应性的登革病毒包膜蛋白结构域Ⅲ(DENV-EDⅢ)特异性单克隆抗体(mAb),并鉴定其特异性及体外中和活性。方法 通过毕赤酵母表达具有良好抗原性的1～4型DENV-EDⅢ蛋白，并以四种DENV血清型EDⅢ蛋白混合免疫BALB/c小鼠，采用聚乙二醇融合技术制备杂交瘤细胞，通过间接ELISA筛选出稳定分泌抗DENV-EDⅢ抗体的杂交瘤细胞，进一步通过间接免疫荧光法对所获得mAb的特异性进行鉴定，并通过改良的酶联免疫斑点微中和实验对所获得的mAb进行体外中和活性测定。结果 获得6株特异性针对1～4型DENV-EDⅢ蛋白的mAb和11株特异性针对某一血清型DENV的EDⅢmAb,其中有1株mAb同时对四种血清型DENV有均衡的体外强中和活性，其对四种血清型DENV的半数抑制剂量(IC₅₀)分别为(0.05、 1.89、 0.02、 3.91)μg/mL。结论 成功筛选获得了一株可同时中和四种血清型DENV的EDⅢ特异性mAb。