人Tnfrsfl 1b-N端多狀的原核表达、纯化及其初步分析

目的 对原核表达和可溶性纯化后的Tnfrsf11b蛋白氨基端的24～106位肽段进行二级结构分析.方法 根据已经发表的人Tnfrsf11b氨基酸序列,利用BLAST程序进行同源性分析,确定所要构建的Tnfrsf11b N 端CRD功能结构域;将目的 基因片段克隆入表达载体 pGEX-6P-1并转化大肠杆菌BL21(DE3),于16.C、0.1 mmol/L IPTG 诱导25～30 h可获得可溶性融合蛋白,经过Glutathione SepharoseTM4 B 亲和层析纯化和 PreScission Protease 酶切,洗脱的蛋白样品经过Superdex75凝胶预装柱进一步纯化,最终获得可溶性、高纯度的蛋白;对目标蛋白进行圆二色谱分析.结果 获得重组质粒pCEX-6P-1-tnfrsf11b并在大肠杆菌中可溶性表达,经亲和层析、酶切、分子筛层析后获得了可溶的、高纯度的Tnfrsf11bN 端功能结构域蛋白并对其进行了圆二色谱分析,发现目标蛋白富含β-sheet.结论 高含量的β-sheet 更有利于蛋白质参与与相互作用,这对其功能的发挥有着重要意义;对此进行研究可以更好的理解这种相互作用,并为进一步研究Tnfrsf11bN端的结构和功能奠定了基础.

Prokaryotic expression,purification and primary bio-chemical properties research for Tnfrsf11b N-terminal protein of homo sapiens