| 基于重组PCR法构建人骨保护素N端的酵母表达载体 |
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| 引用本文： | 李晓霞,朱志峰,王宝利,戴芳,郭刚,张镜宇.基于重组PCR法构建人骨保护素N端的酵母表达载体[J].天津医药,2006,34(11):753-755. |
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| 作者姓名： | 李晓霞 朱志峰 王宝利 戴芳 郭刚 张镜宇 |
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| 作者单位： | 1. 300070,天津医科大学微生物教研室
2. 300070,天津医科大学代谢病医院内分泌研究所 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金;天津市自然科学基金 |
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| 摘 要： | 目的：构建骨保护素（OPG）N端片段的酵母表达载体。方法：OPGN端D1—D4域仅由2个外显子编码。以人基因组DNA为模板．PCR分别扩增外显子2和外显子3，并使外显子2的3’引物和外显子3的5’引物具有相互重叠的一段序列。以2种PCR产物混合物为模板，采用重组PCR扩增OPGN端编码序列，拟插入酵母分泌型表达载体pPIC9K。为使未来分泌表达产物具有完全正确的N末端，再次采用重组PCR策略，将pPIC9K信号肽裂解位点前的一段序列（含单一限制酶位点BamHⅠ）与OPGN端编码序列拼接在一起，从BamH Ⅰ和EcoR Ⅰ位点插入pPIC9K。结果：得到了OPGN端酵母表达载体，测序证实插入序列正确。结论：重组载体的获得为基因工程研制具有生物活性的OPGN端片段奠定了基础。
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| 关 键 词： | 破骨细胞 成骨细胞 聚合酶链反应 克隆 分子 DNA 重组 |
| 收稿时间： | 2006-04-25 |
| 修稿时间： | 2006-04-252006-06-19 |
Construction of Pichia Expression Vector Encoding N-terminal Fragment of Osteoprotegerin Using Recombinant PCR |
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| LI Xiaoxia,ZHU Zhifeng,WANG Baoli,DAI Fang,GUO Gang,Zhang Jingyu.Construction of Pichia Expression Vector Encoding N-terminal Fragment of Osteoprotegerin Using Recombinant PCR[J].Tianjin Medical Journal,2006,34(11):753-755. |
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| Authors: | LI Xiaoxia ZHU Zhifeng WANG Baoli DAI Fang GUO Gang Zhang Jingyu |
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| Institution: | Department of Microbiology, Tianjin Medical University, Tianjin 300070, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | osteoclasts osteoblasts polymerase chain reaction cloning molecular DNA recombinant |
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