星形胶质细胞来源的GJA1?20k在氧化应激后参与神经元保护作用的机制

目的：观察星形胶质细胞（astrocyte）通过上调神经元（neuron）内源性缝隙连接蛋白α1截短单体?20k（gap junction protein alpha 1 truncated monomer? 20k，GJA1?20k）参与氧化应激损伤后神经保护作用的机制。方法：采用C57BL/6胎鼠以原代培养法获取神经元及星形胶质细胞，建立共培养模型，给予神经元过氧化氢（H2O2）损伤，及星形胶质细胞胰岛素样生长因子1（insulin?like growth factor?1，IGF?1）受体阻滞剂AG1024，分别设立Neuron组、Neuron+Stress组、Neuron+Astrocyte +Stress组及Neuron+Astrocyte+Stress+AG1024组，通过Western blot测定神经元GJA1?20k、去磷酸化（non?phosphorylated，NP）?Cx43的表达，谷氨酸转运酶（glutamate transporter?1，GLT?1）、线粒体功能相关蛋白（PGC?1α、mtTFA、Tom20、CoxⅣ）、凋亡相关蛋白（Bcl?2、Bax、Caspases?9）的变化，采用酶联免疫荧光分析（ELFA）及ELISA法分别检测氧化应激因子NAPDH 氧化酶活性和白介素（interleukin，IL）?1β、IL?6、肿瘤坏死因子?α（tumor necrosis factor?α，TNF?α）等炎性因子含量的变化，采用Annexin V?FITC/PI测定神经元凋亡。结果：星形胶质细胞共培养可明显上调在神经元氧化损伤后内源性GJA1?20k和NP?Cx43表达，抑制PGC?1α、mtTFA、Tom20、CoxⅣ的下调，上调凋亡抑制因子Bcl?2表达，下调凋亡促进因子Bax、Caspase?9表达，降低NAPDH氧化酶活性，降低炎性产物IL?1β、IL?6和TNF?α的水平及抑制神经元的凋亡（P < 0.05）。在给予AG1024后，可明显抑制与以上因素相关的星形胶质细胞对神经元的保护作用（P < 0.05）。结论：与IGF?1相关的星形胶质细胞对神经元的保护机制可能与增加神经元内源性GJA1?20k的含量及线粒体功能的保护有关。