利用染色质隔离子构建人基质金属蛋白酶-12转基因表达载体

目的：在构建巨噬细胞特异表达且带有染色质隔离子的人基质金属蛋白酶-12（hMMP-12）转基因表达载体的基础上构建hMMP-12转基因兔动物模型。方法：首先通过RT-PCR方法扩增hMMP-12基因．产物亚克隆到pGEM—T载体，测序后获得pGEM—T-hMMP-12，然后利用pJC13构建带有染色质隔离子和清道夫受体A增强子、启动子和人生长激素尾的亚克隆pJC13-SR，再利用pGEM-T-hMMP-12和pJC13-SR重组质粒，构建巨噬细胞特异性的转基因表达载体pJCl3-SR．hMMP-12，最后pJCl3-SR—hMMP-12表达载体线性化，显微注射家兔受精卵制备转基因兔，并进行PCR扩增及Southern Blot转基因效果分析鉴定。结果：（1）通过DNA测序和限制性核酸内切酶酶切鉴定证实，hMMP-12成功克隆到所需表达载体中；（2）转基因后获得仔兔36只，以PCR检测结果计算，转基因总效率为1．4％-3．4％，整合率为20％-50％；以Southern Blot检测结果计算，转基因总效率为0．5％．2．2％，整合率为13％～17％。结论：转基图表达载体的成功构建，为hMMP-12转基因兔动物模型的构建和研究MMP-12在动脉粥样硬化的形成和发展中的作用机制奠定了基础。