| 人胚神经干细胞分离培养与鉴定方法 |
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| 引用本文： | 赵荣山,李秀芹,郝京生,董玉环,赵亚朴,王本旭.人胚神经干细胞分离培养与鉴定方法[J].华北国防医药,2004,16(2). |
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| 作者姓名： | 赵荣山 李秀芹 郝京生 董玉环 赵亚朴 王本旭 |
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| 作者单位： | 1. 北京军区联勤部军事医学研究所微生物检验科,石家庄,050081
2. 白求恩军医学院病原教研室,石家庄,050081 |
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| 摘 要： | 目的:建立神经干细胞(NSCs)实验室分离、培养方法,为NSCs移植提供细胞源.方法:取4月龄(±15 天)正常孕妇水囊引产胎儿大脑纹状体区组织分离神经干细胞,培养于含碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)和B27的无血清培养基;同时利用单细胞克隆技术进行连续传代培养;利用形态学观察和免疫荧光技术检测神经上皮干细胞蛋白Nestin抗原的表达来鉴定神经干细胞.结果:体外培养的干细胞在bFGF和B27培养基中可不断增殖形成细胞球,并出现少量细胞分化.单细胞培养4天即开始分裂,同时伴有个别细胞分化;出现大量神经球一般为15天;分化的细胞在30天开始分解,50天左右基本消失.细胞培养3个月(每月补液1次)仍具有分裂增殖能力.单细胞克隆可连续传代10次,仍具增殖分化能力.液氮冻存6个月的细胞复苏后仍具增殖分化能力.单细胞克隆传代增殖的细胞球经Nestin免疫荧光鉴定,呈阳性结果,证实其胚胎源性.结论:采用bFGF和B27的无血清培养基能促进神经干细胞连续稳定增殖,并有少量分化,细胞体外培养3个月、克隆连续传代10次情况下的细胞仍具有神经干细胞特性.
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| 关 键 词： | 神经干细胞 胚胎 细胞分离 细胞培养 生物学鉴定法 |
Isolation,culture and identification of human embryo neural stem cells |
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