尼古丁对血管内皮细胞表达细胞间粘附分子—1及基基因转录调控和信号转导的信号

目的和方法：吸烟是慢性阻塞性肺疾患、动脉粥样硬化等多种疾病的主要危险因素之一，但吸烟促使这些疾病发生的详细机制尚未完全明了。本文探讨作为香烟烟雾中主要成分的尼西丁对白细胞活化及白细胞与内皮细胞粘附的作用，并观察764－3（中药丹参提取物）对其影响，有助于阐明尼古丁在炎症性疾病发病中的作用并为寻找有效的防治炎症损伤的措施提供新的思路。结果：1．利用体外原代培养的人脐静脉内皮细胞（HUVEC）为靶细胞，首先观察到尼古丁促进中性粒细胞与内皮细胞粘附；2．用流式细胞术和Northern印迹杂交法分别观察到尼西丁可促进内皮细胞表面ICAM－1蛋白和mRNA表达，且呈时间和剂量依赖的趋势；3．用分子克隆技术成功地构建了4种含人ICAM－1基因不同长度的启动子序列和两种含顺式作用元件发生定点和突变序列的荧光素酶报告基因质粒；4．用真核细胞转染技术证实尼古丁的作用与细胞内信号转导机制之间的关系。观察到尼古丁可促使内皮细胞内游离钙离子浓度的增加（激光共聚焦显微镜法）、PKC活化（γ－^32P－ATP掺入法）入Ras蛋白的活化（GST－RBD沉淀和Western印迹杂交法）；6．观察到764－3分别抑制尼古丁诱导的中性粒细胞与内皮细胞的粘附增加、内皮细胞ICAM－1蛋白和mRNA表达增加、内皮细胞胞浆游离钙离子浓度的增加以及PKC的活化。结论：尼古丁可能通过作用于ICAM－1启动子区下游NF－κB位点，诱导TCAM－1基因表达，在尼古丁所致的炎症性疾病发病中起重要作用；764－3拮抗尼古丁的作用提示其在吸烟所致炎症性疾病的防治中可能具有潜在的意义。