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重组腺病毒表达的融合蛋白SH2-caspase 8对K562细胞凋亡的影响
引用本文:王林,李会,刘章玲,祖白玲,黄峥兰,向华,冯文莉. 重组腺病毒表达的融合蛋白SH2-caspase 8对K562细胞凋亡的影响[J]. 临床检验杂志, 2013, 31(8): 612-616
作者姓名:王林  李会  刘章玲  祖白玲  黄峥兰  向华  冯文莉
作者单位:重庆医科大学检验医学院/临床检验诊断学省部共建教育部重点实验室,重庆400016;重庆医科大学检验医学院/临床检验诊断学省部共建教育部重点实验室,重庆400016;重庆医科大学检验医学院/临床检验诊断学省部共建教育部重点实验室,重庆400016;重庆医科大学检验医学院/临床检验诊断学省部共建教育部重点实验室,重庆400016;重庆医科大学检验医学院/临床检验诊断学省部共建教育部重点实验室,重庆400016;重庆医科大学检验医学院/临床检验诊断学省部共建教育部重点实验室,重庆400016;重庆医科大学检验医学院/临床检验诊断学省部共建教育部重点实验室,重庆400016
基金项目:国家自然科学基金(30871102)。
摘    要:
摘要:目的:研究表达融合蛋白SH2-caspase 8的重组腺病毒AdE-SH2-caspase 8-HA-GFP(SC)对BCR/ABL阳性的慢性粒细胞白血病K562细胞凋亡的影响。 方法:将重组的腺病毒SC转染K562细胞(SC组),分别设突变AdE-SH2m-caspase 8-HA-GFP(SmC)组、病毒空载体AdEGFP(CMV)组和PBS对照组。用荧光显微镜和流式细胞仪(FCM)检测病毒转染效率,western blot检测融合蛋白及凋亡相关蛋白caspase 3、多聚二磷酸腺苷核糖聚合酶(PARP)的表达情况,用光学显微镜观察经瑞氏染色后的细胞形态,FCM和DNA梯度电泳检测细胞凋亡情况。 结果:FCM和荧光显微镜检查结果显示,重组腺病毒在K562细胞中的转染效率较高;融合蛋白SH2-caspase 8-HA和SH2m-caspase 8-HA可在K562细胞中表达;瑞氏染色后SC组出现明显的凋亡形态改变;FCM检测结果表明, SC组与SmC组、CMV组和PBS组相比较,其早期凋亡细胞明显增高(t分别为6.945、19.083和16.470,P均<0.05),DNA梯度电泳检测结果发现SC组和SmC组可出现细胞凋亡特异性的梯度条带,western blot结果表明,SC组和SmC组凋亡相关蛋白caspase 3、PARP活化片段的表达水平升高。 结论:重组腺病毒SC表达的SH2-caspase 8融合蛋白能明显诱导K562细胞的凋亡。

关 键 词:细胞凋亡;SH2结构域;半胱天冬酶8(caspase 8);融合蛋白;K562细胞
收稿时间:2013-07-02

Effect of SH2-caspase 8 fusion protein expressed by recombinant adenovirus on apoptosis of K562 cell line
Abstract:
Keywords:cell apoptosis   Src homology-2 domain   caspase 8   fusion protein   K562 cell
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