SHIP1 基因过表达非小细胞肺癌细胞系的建立及其对细胞增殖能力的影响

目的：观察SHIP1 对NSCLC细胞增殖的影响。方法：由NCBI Gene 数据库查询获得人SHIP1 基因CDS区,插至载体pTSB-CMV-MCS-SBP-3Flag-EGFP,构建SHIP1 真核过表达质粒;进一步利用其构建SHIP1 过表达慢病毒。用该慢病毒感染A549、SPCA-1 和PC-9 细胞株,获得SHIP1 稳定过表达NSCLC细胞系。Western blotting 和qRT-PCR分别从蛋白水平和mRNA水平检测SHIP1 的表达变化。采用MTT法和克隆形成实验检测过表达SHIP1 的PC-9 细胞增殖活力和克隆形成能力。Western blotting检测AP-1 蛋白复合体各组分的表达。结果：SHIP1 真核过表达质粒经测序证实构建成功。稳定过表达SHIP1 的A549、SPCA-1 和PC-9 细胞,在荧光显微镜下可见均一表达绿色荧光。与阴性对照组比较,细胞中SHIP1 在mRNA（P<0.01）及蛋白水平均明显升高。在PC-9 细胞中,过表达SHIP1 使细胞增殖、克隆形成能力降低（均P<0.01）,p-c-Jun、FosB 等表达降低。结论：成功构建了稳定过表达SHIP1 的A549、SPCA-1和PC-9 细胞模型;过表达SHIP1可通过抑制AP-1 家族蛋白抑制NSCLC细胞增殖能力。