| 慢病毒介导的shRNA干扰大鼠施万细胞RSC96 MYH14基因的表达 |
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| 引用本文： | 胡皓,孟威,刘安堂,汪汇,朱晓海,江华,钱玉鑫.慢病毒介导的shRNA干扰大鼠施万细胞RSC96 MYH14基因的表达[J].第二军医大学学报,2018,39(10):1132-1137. |
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| 作者姓名： | 胡皓 孟威 刘安堂 汪汇 朱晓海 江华 钱玉鑫 |
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| 作者单位： | 1. 海军军医大学(第二军医大学)长征医院整形外科, 上海 200003;2. 武警总队医院皮肤科, 北京 100600;3. 上海伊莱美医疗美容医院, 上海 200070*通信作者 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金（31271264）. |
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| 摘 要： | 目的 应用RNA干扰技术构建大鼠肌球蛋白重链14（MYH14）基因重组慢病毒载体并鉴定。方法 根据MYH14 mRNA序列设计合成单链引物形成双链寡核苷酸序列，连接入经AgeⅠ和BamHⅠ双酶切线性化的GV298慢病毒质粒载体中，菌液经PCR鉴定并测序验证。取测序正确的菌液提取质粒转染大鼠施万细胞RSC96，利用免疫荧光法观察转染效率，蛋白质印迹法筛选有效敲低MYH14的shRNA质粒，CCK-8法检测转染后RSC96细胞的活力。结果 合成3对MYH14-shRNA序列并将其克隆到GV298载体中，构建了重组质粒MYH14-shRNA1、2、3，经菌液PCR鉴定和测序筛选出测序正确的载体MYH14-shRNA1和MYH14-shRNA2。免疫荧光检测结果显示转染72 h时RSC96细胞荧光表达最强；蛋白质印迹法检测结果显示，与阴性对照（scramble序列）组相比，MYH14-shRNA2转染后RSC96细胞中MYH14蛋白的表达水平降低（0.57±0.15 vs 1.11±0.06，P<0.01），而MYH14-shRNA1转染后MYH14蛋白表达水平差异无统计学意义（P>0.05）。MYH14-shRNA2转染RSC96细胞24 h后的细胞活力与阴性对照组相比差异无统计学意义（1.09±0.16 vs 1.00±0.15，P>0.05）。结论 成功构建大鼠MYH14基因重组慢病毒干扰载体，该载体能有效下调RSC96细胞中MYH14的表达。
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| 关 键 词： | 肌球蛋白重链14 短发夹RNA 慢病毒 施万细胞 |
| 收稿时间： | 2018/6/12 0:00:00 |
| 修稿时间： | 2018/9/10 0:00:00 |
Interference effect of lentiviral mediated shRNA on expression of MYH14 gene in rat Schwann cells RSC96 |
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| HU Hao,MENG Wei,LIU An-tang,WANG Hui,ZHU Xiao-hai,JIANG Hua and QIAN Yu-xin.Interference effect of lentiviral mediated shRNA on expression of MYH14 gene in rat Schwann cells RSC96[J].Academic Journal of Second Military Medical University,2018,39(10):1132-1137. |
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| Authors: | HU Hao MENG Wei LIU An-tang WANG Hui ZHU Xiao-hai JIANG Hua and QIAN Yu-xin |
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| Institution: | 1. Department of Plastic Surgery, Changzheng Hospital, Navy Medical University(Second Military Medical University), Shanghai 200003, China;2. Department of Dermatology, General Hospital of Armed Police Forces, Beijing 100600, China;3. Shanghai Elikeme Medical Cosmetology Hosipital, Shanghai 200070, China*Corresponding author |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | myosin heavy chain 14 short hairpin RNA lentivirus Schwann cells |
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