颅骨锁骨发育不全患者牙囊细胞的体外生物学特征

目的：在成功分离培养正常同龄人牙囊细胞（dental follicle cells，DFCs）与颅骨锁骨发育不全（cleidocranial dysplasia， CCD）患者牙囊细胞（DFCs-CCD）的基础上，研究其一般体外生物学特征，包括增殖、克隆、成骨及破骨能力。方法：采用 BrdU细胞增殖实验与倍增法研究两种来源 DFCs 增殖能力；用结晶紫染液染色培养12 d 的两种 DFCs，分析其克隆形成能力；并用成骨诱导液诱导两种 DFCs 成骨，用 Western blot 和茜素红染色法分析成骨能力，用实时定量 PCR 方法研究其破骨基因表达差异。结果：DFCs-CCD 的 BrdU 阳性率高于 DFCs，同时 DFCs 的群体倍增时间为（1．834±0．093）d，而 DFCs-CCD 的则为（1．394±0．028）d，差异具有统计学意义（P ＜0．05）；DFCs-CCD 的克隆集落多于 DFCs，但 Runt 相关转录因子2（Runt-related transcrip-tion factor 2，Runx2）、成骨细胞特异性转录因子 Osterix、骨钙素（osteocalcin，Ocn）等成骨相关蛋白表达水平低，而其茜素红染色所示钙化结节同样较少；同时，DFCs-CCD 高表达核因子-κB 受体活化因子（receptor activator for nuclear factor-κB，RANK）和骨保护素（osteoprotegerin，OPG）等破骨相关基因（P ＜0．05），而核因子-κB 受体活化因子配体（receptor activator for nuclear factor-κB ligand，RANKL）水平无统计学差异（P ＞0．05）。结论：相比 DFCs，DFCs-CCD 具有更强的增殖、克隆能力和更弱的成骨能力，而破骨基因表达紊乱。

Invitro biologic characteristics of dental follicle cells with cleidocranial dysplasia

Objective：To study the invitro biologic characteristics of dental follicle cells with cleidocranial dysplasia （DFCs-CCD） including proliferation ability,clone-forming efficiency,osteogenesis and osteoclastogenesis abilities.Methods：Brdu cell proliferation and population doubling time assays for cell proliferationo ability,crystal violet staining with cells cultured for 12 days for clone-forming efficiency,Western blot and alizarin red staining for osteogenesis ability and real-time PCR for osteoclastogenesis ability.Results：DF-Cs-CCD gave higher BrdU positive results.The population doubling time was （1 .834 ±0.093）d of DFCs and （1 .394 ±0.028）d of DFCs-CCD （P 〈0.05）.DFCs-CCD presented more clones and weaker expression of Runx2,Osrerix,Ocn and alizarin red staining. DFCs-CCD also expressed stronger levels of OPG and RANK,but no statistical difference of RANKL（P〉0.05）.Conclusions：DFCs-CCD exhibited stronger cell proliferation and clone-forming abilities,weaker osteogenesis and disorganized osteoclastogenesis abilities.