| K562细胞消减cDNA文库的构建 |
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| 引用本文： | 陈汉春,孟巧,王吉伟.K562细胞消减cDNA文库的构建[J].中国医师杂志,2003,5(1):3-6. |
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| 作者姓名： | 陈汉春 孟巧 王吉伟 |
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| 作者单位： | 中南大学湘雅医学院分子生物学研究中心,湖南,长沙,410078 |
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| 基金项目： | 中华医学基金资助项目 (CMBNo.99- 698) |
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| 摘 要： | 目的：构建氯化血红素诱导性K562细胞抑制消减cDNA文库，以期鉴定出K562细胞中氯化血红素诱导性表达的珠蛋白合成调节因子cDNA基因。方法：采用不同浓度的氯化血红素诱导培养K562细胞，经联苯胺阳性细胞百分率及血红蛋白浓度分析，选择其最佳诱导浓度。分别提取氯化血红素诱导培养的K562细胞（tester，检测子）和未加诱导剂培养的K562细胞（driver，驱赶子）mRNA，逆转录合成双链cDNA。经两轮消减杂交，两轮PCR扩增后，正向消减的PCR产物与T载体连接，构建K562细胞抑制消减cDNA文库，文库经蓝-白筛选后，纯化阳性克隆质粒，EcoR I酶切及PCR扩增插入片段。结果：以50μmol/L氯化血红素诱导K562细胞，其联苯胺阳性细胞百分率及血红蛋白浓度均达到最大值，故选择50μmol/L氯化血红素诱导培养K562细胞并构建K562细胞抑制消减cDNA文库。文库鉴定证实其阳性克隆中分别含有不同长度的插入片段。结论：成功构建了氯化血红素诱导性K562细胞抑制消减cDNA文库，该消减cDNA文库结合生物信息学（Bioinformatics）分析可用于深入研究K562细胞内氯化血红素诱导性表达基因的结构和功能。
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| 关 键 词： | 构建 K562细胞 抑制性消减杂交 cDNA文库 氧化血红素 |
| 文章编号： | 1008-1372(2003)01-0003-04 |
| 修稿时间： | 2002年8月8日 |
Construction of Subtractive cDNA Library of K562 Cells |
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| CHEN Han-chun,MENG Qiao,Wang Ji-wei.Research Center for Molecular Biology,Xiangya School of Medicine,Central South University,Changsha,Hunan ,China.Construction of Subtractive cDNA Library of K562 Cells[J].Journal of Chinese Physician,2003,5(1):3-6. |
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| Authors: | CHEN Han-chun MENG Qiao Wang Ji-weiResearch Center for Molecular Biology Xiangya School of Medicine Central South University Changsha Hunan China |
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| Institution: | CHEN Han-chun,MENG Qiao,Wang Ji-wei.Research Center for Molecular Biology,Xiangya School of Medicine,Central South University,Changsha,Hunan 410078,China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | K562 cell line Suppression subtractive hybridization cDNA library |
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