柱前衍生HPLC-UV同时测定人工牛黄中胆酸及猪去氧胆酸的含量

目的建立柱前衍生HPLC-UV同时测定人工牛黄中胆酸及猪去氧胆酸的含量。方法以2-萘基溴甲基酮为衍生试剂,三乙胺为催化剂,60℃水浴条件下对胆酸及猪去氧胆酸进行衍生,考察衍生试剂用量、催化剂用量及反应时间等对衍生产物的影响,确定衍生反应的条件,然后考察建立HPLC-UV分离检测方法对人工牛黄中胆酸及猪去氧胆酸含量进行测定。结果当衍生试剂的摩尔量与胆酸及猪去氧胆酸的摩尔总量的比大于30∶1,催化剂的摩尔量与两者的摩尔总量的比在5∶1⁶0∶1范围内,在60℃水浴条件下反应50min时,胆酸及猪去氧胆酸的衍生物反应完全。方法学验证:胆酸在0.4⁵.0μg范围内线性关系良好（r=0.9995）;猪去氧胆酸在0.12¹.5μg范围内线性关系良好（r=0.9998）。胆酸的平均回收率（n=6）为100%,RSD为2.40%;猪去氧胆酸的平均回收率（n=6）为101%,RSD为1.33%。此批次人工牛黄样品中胆酸的含量为5.55%,猪去氧胆酸的含量为2.55%。结论本方法灵敏度高、准确可靠、稳定性和重复性好,可用于测定人工牛黄中胆酸及猪去氧胆酸的含量。