| 抑制性消减杂交构建乙型肝炎病毒X蛋白羧基端缺失40个氨基酸cDNA文库 |
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| 引用本文： | 王力,朱明华,李咏梅,李芳梅,.抑制性消减杂交构建乙型肝炎病毒X蛋白羧基端缺失40个氨基酸cDNA文库[J].第二军医大学学报,2006,27(10):1081-1084. |
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| 作者姓名： | 王力 朱明华 李咏梅 李芳梅 |
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| 作者单位： | 1. 成都军医昆明总医院病理科,昆明,650031
2. 第二军医大学长海医院病理科,上海,200433 |
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| 摘 要： | 目的:应用抑制性消减杂交(SSH)技术筛选乙型肝炎病毒(HBV)X蛋白羧基端缺失40个氨基酸(HBx3'-40)反式激活基因,克隆其反式激活的相关靶基因.方法:以HBx3'-40蛋白表达质粒pcDNA3(-)-HBx3'-40 转染Huh-7细胞,以转染pcDNA3(-)-HBx为对照;制备转染后的细胞裂解液,提取总RNA并逆转录为cDNA,经RsaⅠ酶切后,将实验组cDNA分成两组,分别与两种不同的接头衔接,再与对照组cDNA进行两次消减杂交及两次抑制性PCR,将产物与pUCm-T载体连接,构建cDNA消减文库,并转染大肠杆菌JM109进行文库扩增,随机挑选克隆PCR扩增后进行测序及同源性分析.结果:成功构建了HBx3'-40反式激活基因差异表达的cDNA文库,文库扩增后得到154个白色克隆,经菌落PCR分析,克隆包含有200～800 bp的插入片段,部分片段编码蛋白涉及原癌基因、信号转导相关基因、细胞生长因子相关基因、细胞凋亡、代谢和蛋白合成等相关基因.结论:应用抑制性消减杂交技术成功构建了HBx和HBx3'-40差异表达的cDNA消减文库,为进一步阐明HBx3'-40在HBV感染相关的肝细胞癌发生中的分子生物学机制提供理论依据.
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| 关 键 词： | 乙型肝炎病毒X蛋白 基因文库 抑制性消减杂交 |
| 文章编号： | 0258-879X（2006）10-1081-04 |
| 收稿时间： | 2006-04-27 |
| 修稿时间： | 2006-06-13 |
Construction of cDNA library of hepatitis B virus with X protein C-terminally truncated 40 amino acids by suppression subtractive hybridization method |
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| WANG Li,ZHU Ming-hu,LI Yong-mei,LI Fang-mei.Construction of cDNA library of hepatitis B virus with X protein C-terminally truncated 40 amino acids by suppression subtractive hybridization method[J].Academic Journal of Second Military Medical University,2006,27(10):1081-1084. |
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| Authors: | WANG Li ZHU Ming-hu LI Yong-mei LI Fang-mei |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | hepatitis B virus X protein gene library suppression subtractive hybridization |
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