三七总皂苷对脑损伤新生鼠海马神经干细胞钙离子和膜电位的调节

背景：钙离子参与神经信号的传递和神经递质的释放，脑海马神经干细胞的增殖过程必然和钙离子关系紧密，同时这一过程也反应在膜电位的变化上。目的：探讨中药三七总皂苷对脑损伤新生鼠海马神经干细胞Ca2＋和膜电位的影响。设计、时间及地点：离子水平，体外细胞学电生理观察，于2007—03／05在北京中医药大学细胞培养室完成。材料：清洁级新生24h内Wistar鼠16只。三七总皂苷为内蒙古康源药业有限公司产品，批号ZZ-5802-内卫药准字（1999）1787号，规格350g／10L。钙离子荧光探针Fluo3-AM、亲脂性阴离子荧光探针DiBAC。（3）为Sigma产品。方法：取新生鼠脑海马组织，采用无血清培养法分离扩增神经干细胞。设立3组：正常组细胞加入含糖Earle氏液，并始终在正常气体条件下培养：模型组、用药组细胞采用糖氧剥离法体外模拟脑缺血再灌注损伤，即加入无糖Earle氏液，将培养板放入缺氧罐内模拟脑缺血状态。用药组在换液时及脑缺血4h后分别加入17．5mg／L三七总皂苷1．75μg。细胞内钙离子和膜电位分别用Fluo3．AM、DiBAC4（3）荧光探针进行标记。主要观察指标：神经干细胞Ca2＋、膜电位荧光值的变化。结果：缺血再灌注后30min～1h，正常组神经干细胞内Ca2＋浓度呈上升趋势，至再灌注2h胞内Ca2＋浓度达到最高峰，再灌注3h胞内Ca2＋浓度开始降低；膜电位变化与Ca2＋浓度变化完全相反。与正常组比较，模型组再灌注后30min，1h，2h，3h神经干细胞内Ca2＋浓度均明显升高（P〈0．05～0．001），膜电位均明显下降（P〈0．001）：经三七总皂苷处理可抑制Ca2＋浓度升高（P〈0．05～0．01），并抑制膜电位下降（P〈0．05～0．001）。结论：防止细胞内钙超载和细胞膜电位降低可能是三七总皂苷保护损伤脑海马神经干细胞的作用机制之一。

Innuence of Panax pseudo-ginseng on Ca2+and membrane potential of neural stem cells in neonatal rat hippocampus following brain injury