| RNA干扰对MDA-MB-231乳腺癌细胞株骨保护素基因表达的抑制作用 |
| |
| 引用本文： | 张帆,唐振宁,杨新华,徐琰,范林军,张毅,陈莉,周艳,陈庆秋,姜军. RNA干扰对MDA-MB-231乳腺癌细胞株骨保护素基因表达的抑制作用[J]. 中华乳腺病杂志(电子版), 2011, 5(2): 189-197 |
| |
| 作者姓名： | 张帆 唐振宁 杨新华 徐琰 范林军 张毅 陈莉 周艳 陈庆秋 姜军 |
| |
| 作者单位： | 第三军医大学西南医院乳腺疾病中心,重庆,400038 |
| |
| 基金项目： | 国家自然科学基金资助项目，第三军医大学2006年度中青年科研基金 |
| |
| 摘 要： | 目的 构建针对骨保护素（OPG）基因的一个载体编码三条短发夹RNA（shRNA）的真核表达质粒，观察其对MDA—MB-231乳腺癌细胞株OPG表达的抑制作用。方法选择3个针对OPG基因的RNA干扰（RNAi）位点，分别设计合成3对编码相应shRNA的DNA单链，每对单链连接形成双链后分别与线性化载体pGenesil-1．1、pGenesil-1．2、pGenesil-1．3连接形成pGenesil-1．1-shRNAl、pGenesil-1．2-shRNA2、pGenesil-1．3-shRNA3，对以上重组载体反复酶切连接，构建成重组质pGenesil—1．1—1．2-1．3-shRNA1-shRNA2-shRNA3，酶切鉴定和测序无误后，将该质粒转染MDA—MB一231细胞，以G418加压筛选，对转染细胞行单克隆化，稳定转染细胞行RT—PCR和Westernblot检测，确定其对OPG基因表达抑制作用。统计分析采用单因素方差分析和SLD分析法。结果成功构建了pGenesil-1．1—1．2-1．3-shRNA1-shRNA2-shRNA3重组质粒；以该质粒稳定转染MDA—MB-231细胞后其OPGmRNA和蛋白表达均较对照差异有统计学意义（P〈0．05），RNAi对OPGmRNA和蛋白的表达抑制率分别为91％和73％。结论本研究构建了针对OPG的一个载体编码3条shRNA的真核表达质粒，通过RNAi抑制了MDA—MB-231细胞OPG基因表达，为进一步深入探讨肿瘤细胞自身OPG表达在乳腺癌骨转移发生发展中的作用提供了相关实验基础。
|
| 关 键 词： | 乳腺肿瘤 骨保护素 RNA干扰 MDA—MB-231细胞 |
Inhibitory effect of RNA interference on osteoprotegerin gene expression in MDA-MB-231 breast cancer cell line |
| |
| ZHANG Fan,TANG Zhen-ning,YANG Xin-hua,XU Yan,FAN Lin-jun,ZHANG Yi,CHENG Li,ZHOU Yan,CHEN Qin-qiu,JIANG Jun. Inhibitory effect of RNA interference on osteoprotegerin gene expression in MDA-MB-231 breast cancer cell line[J]. Chinese Journal of Breast Disease(Electronic Version), 2011, 5(2): 189-197 |
| |
| Authors: | ZHANG Fan TANG Zhen-ning YANG Xin-hua XU Yan FAN Lin-jun ZHANG Yi CHENG Li ZHOU Yan CHEN Qin-qiu JIANG Jun |
| |
| Affiliation: | ZHANG Fan,TANG Zhen-ning,YANG Xin-hua,XU Yan,FAN Lin-jun,ZHANG Yi,CHENG Li,ZHOU Yan,CHEN Qin-qiu,JIANG Jun.Breast Disease Center,Southwest Hospital,Third Military Medical University,Chongqing 400038,China |
| |
| Abstract: | Objective To construct a eukaryotic expression plasmid that expresses 3 shRNAs(short hairpin RNAs)targeting osteoprotegerin(OPG)gene and to investigate the inhibitory effect of RNA interference(RNAi)on osteoprotegerin gene expression in MDA-MB-231 breast cancer cell line.Methods Three sites targeting osteoprotegerin gene were selected.Accordingly,three pairs of single stranded DNAs were designed,synthesized and annealed to double stranded DNAs.The double stranded DNAs were cloned into pGenesil-1.1,pGenesil-... |
| |
| Keywords: | breast neoplasms osteoprotegerin RNA interference MDA-MB-231 cell |
| 本文献已被 CNKI 维普 万方数据 等数据库收录！ |
|
